EB病毒（EBV）与某些类型的恶性淋巴瘤关系非常密切，在体外实验EBV能诱导人外周血淋巴细胞发生转化。基于我们前期实验检测获得EBV转化淋巴细胞的转录组学数据，通过构建EBV诱导淋巴细胞转化的分子调控网络及关键节点，我们已筛选出EBV诱导淋巴细胞转化的关键节点分子。本课题挑选其中的两个候选关键分子（E2F1、PLK1），拟采用RNA干扰等细胞实验方法，结合临床淋巴瘤病理标本检测验证，进一步研究确定这些候选关键分子的功能及其在淋巴细胞转化和淋巴瘤发生中的作用和意义，分析探查EB病毒基因与转化细胞候选关键基因的功能关系，深入揭示EB病毒与淋巴细胞转化中关键宿主分子的相互作用及诱导细胞转化的机制。

Epstein-Barr virus (EBV) is closely associated with some types of human malignant lymphomas. EBV can transform human peripheral blood lymphocytes in vitro. Based on our previous transcriptomic data of the EBV-transformed lymphocytes in vitro, we have found some candidate key molecules (E2F1, PLK1) selected from molecular regulatory network and critical points of human lymphocyte transformation induced by EB virus. This project will further study the function of these candidate key molecules (E2F1, PLK1) and their role in transformation of the human lymphocytes and lymphomagenesis by using RNA interfering and cellular experiment method, combining with detection of clinical lymphoma samples, and analyze functional relations between EBV genes and those key molecules in EBV-transformed cells. We will investigate interactions between EB virus and key molecules of host cells in lymphocyte transformation and the molecular mechanism of EBV-induced host lymphocyte transformation.

从健康献血员采集新鲜血液，分离外周血淋巴细胞（PBL）；加入B95-8标准株EB病毒液，经体外细胞培养，获得永生化的转化淋巴母细胞系。采用实时定量PCR、Western blot检测和验证两个候选关键基因（PLK1, E2F1）在正常人淋巴细胞和体外EBV转化淋巴母细胞系中的表达水平。在转化淋巴母细胞中PLK1, E2F1的表达均高于其在正常人淋巴细胞中的表达。采用免疫组化染色，检测、验证候选基因PLK1, E2F1在临床（EBV阳性/阴性）人淋巴瘤组织中的表达。检测发现恶性淋巴瘤组织中PLK1蛋白表达阳性率为75.3% (113/150例), 高于淋巴结反应性增生组织中的表达（40.0%，12/30例）(p<0.01) ；E2F1蛋白在恶性淋巴瘤组织中表达阳性率为82.0% (123/150例), 高于在淋巴结反应性增生组织中的E2F1表达（66.7%，20/30例）(p<0.01)。鉴于PLK1在EBV转化淋巴母细胞中高表达，我们因此设计针对候选关键基因（PLK1）表达下调的实验方案，采用shRNA-PLK1干扰沉默PLK1基因表达的实验方法，观察对细胞生长及表型改变的效应，研究鉴定关键分子的生物学功能及其在细胞转化中的作用机理。结果表明，采用慢病毒表达系统干扰EBV阳性淋巴瘤Raji细胞中PLK1基因表达，可抑制细胞增殖、迁移侵袭，诱导周期阻滞与细胞凋亡。我们目前正在进行对另一个候选关键基因E2F1的细胞实验和功能研究。