缺氧诱导肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化（EMT）是肾小管间质纤维化的一个关键过程，研究EMT的调控机制对于抗肾间质纤维化具有重要意义。申请者前期研究证实，胆绿素还原酶（BVR）对PI3K/Akt信号通路的调控参与了缺氧肾小管EMT的发生发展，然而BVR活化PI3K、Akt的具体分子机制，以及三者之间的结合方式尚需进一步研究。本项目拟以缺氧诱导的近曲肾小管上皮细胞为研究对象，应用免疫共沉淀、Akt Ser473位点突变、体外磷酸化等技术，首先论证BVR对Akt Ser473位点的直接磷酸化；而后采用底物模拟多肽的方法，验证以BVR的YMXM结构域为靶点，解聚PI3K-BVR-Akt信号级联复合体逆转缺氧肾小管EMT的可行性，从而明确BVR调控PI3K-Akt信号的具体机制和PI3K-BVR-Akt信号级联体形成在缺氧肾小管EMT中的关键作用，并对模仿多肽的体内应用进行初步探索。

缺氧诱导肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化（EMT）是肾小管间质纤维化的一个关键过程，在该过程中胆绿素还原酶（BVR）对PI3K/Akt信号通路的激活参与了缺氧肾小管EMT的发生发展，但是BVR活化PI3K、Akt的机制和肾小管缺氧的机理还不清楚。本项目研究发现，肾间质小血管网毁损是肾小管上皮细胞缺氧的主要原因，BVR的表达分布与肾小血管丧失密切相关，肾小管上皮细胞HIF-1α分布与BVR一致，但是缺氧诱导的活性氧不影响BVR的表达水平。体外免疫共沉淀实验证实，随缺氧肾小管上皮细胞BVR表达增加，与其结合的磷酸化Akt也相应增加。以上结果表明缺氧时肾小管上皮细胞内HIF-1α是BVR增加的原因，增加的BVR可以结合并激活Akt，最终参与肾间质纤维化。另外，我们还发现BVR参与肾间质巨噬细胞活化状态的调节。因此，针对HIF-1α-BVR-Akt信号通路干预，将为肾纤维化分子治疗提供新靶点。