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高效表达人IL-24重组蛋白HEK293工程细胞株的建立和鉴定

高效表达人IL-24重组蛋白HEK293工程细胞株的建立和鉴定
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  • 批准号:81071855
  • 批准年度: 2010年
  • 学科分类:肿瘤生物治疗(H1611) |
  • 项目负责人:江红
  • 负责人职称:副教授
  • 依托单位:北京交通大学
  • 资助金额:10万元
  • 项目类别:面上项目
  • 研究期限:2011年01月01日 至 2011年12月31日
  • 中文关键词: IL-24;重组蛋白;HEK293;细胞株;鉴定
  • 英文关键词:暂无数据

项目摘要

中文摘要

IL-24能够在体内和体外抑制多种肿瘤细胞生长,选择性诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞没有明显毒副作用,它具有免疫调节能力,是一种比p53更有广谱抗瘤活性的第一个既抑制肿瘤生长又刺激免疫系统的基因。它和其他药物的联合使用可产生叠加的抗瘤效果,目前正在进行Ⅱ期临床实验研究。在哺乳动物细胞中表达的IL-24蛋白对保持其高效的生物学活性至关重要,分泌表达的可溶性IL-24蛋白具有抗瘤功能和Th1样细胞因子样活性,我们实验室已经在HEK293细胞中分泌表达了带myc和His标签的IL-24重组蛋白。为了提高重组蛋白的分泌表达水平,我们首先以全长的IL-24为研究对象,建立高效的哺乳动物工程细胞表达体系;其次,筛选具有生物学活性的IL-24截短突变体,获得高效分泌表达的工程细胞株;最后,对工程细胞株进行无血清悬浮培养的驯化,对重组蛋白进行纯化和鉴定。本课题能够为IL-24有效地应用于临床奠定实验基础。

结题摘要

IL-24能够在体内和体外抑制多种肿瘤细胞生长,选择性诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞没有明显毒副作用。它具有免疫调节能力,是一种比p53更有广谱抗瘤活性的第一个既抑制肿瘤生长又刺激免疫系统的基因。它和其他药物的联合使用可产生叠加的抗瘤效果,目前正在进行Ⅱ期临床实验研究。在哺乳动物细胞中表达的IL-24蛋白对保持其高效的生物学活性至关重要,分泌表达的可溶性IL-24蛋白具有抗瘤功能和Th1样细胞因子样活性。为了提高重组蛋白的分泌表达水平,我们首先以全长的IL-24为研究对象,选用不同的表达载体建立了高效的哺乳动物工程细胞表达体系,可以用Western-blot方法直接检测细胞培养上清中的目的蛋白,上清中的蛋白对A375细胞的体外增殖具有显著的抑制作用,重组蛋白带有His标签,利于下一步的纯化工作。其次,通过生物模建方法获得一条三十个氨基酸残基组成的多肽,它对A375细胞体外增殖作用的显著抑制作用可被IL24抗体和IL24受体的抗体中和。本研究获得了高效分泌表达IL-24的工程细胞株和多肽,为IL-24有效地应用于临床的肿瘤治疗提供实验依据。

评估说明

    国家自然科学基金项目“高效表达人IL-24重组蛋白HEK293工程细胞株的建立和鉴定”发布于爱科学iikx,并永久归类于相关科学基金导航中,仅供广大科研工作者查询、学习、选题参考。国科金是根据国家发展科学技术的方针、政策和规划,以及科学技术发展方向,面向全国资助基础研究和应用研究,发挥着促进我国基础研究源头创新的作用。国科金的真正价值在于它能否为科学进步和社会发展带来积极的影响。

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