中文摘要
IL-24能够在体内和体外抑制多种肿瘤细胞生长,选择性诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞没有明显毒副作用,它具有免疫调节能力,是一种比p53更有广谱抗瘤活性的第一个既抑制肿瘤生长又刺激免疫系统的基因。它和其他药物的联合使用可产生叠加的抗瘤效果,目前正在进行Ⅱ期临床实验研究。在哺乳动物细胞中表达的IL-24蛋白对保持其高效的生物学活性至关重要,分泌表达的可溶性IL-24蛋白具有抗瘤功能和Th1样细胞因子样活性,我们实验室已经在HEK293细胞中分泌表达了带myc和His标签的IL-24重组蛋白。为了提高重组蛋白的分泌表达水平,我们首先以全长的IL-24为研究对象,建立高效的哺乳动物工程细胞表达体系;其次,筛选具有生物学活性的IL-24截短突变体,获得高效分泌表达的工程细胞株;最后,对工程细胞株进行无血清悬浮培养的驯化,对重组蛋白进行纯化和鉴定。本课题能够为IL-24有效地应用于临床奠定实验基础。
结题摘要
IL-24能够在体内和体外抑制多种肿瘤细胞生长,选择性诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞没有明显毒副作用。它具有免疫调节能力,是一种比p53更有广谱抗瘤活性的第一个既抑制肿瘤生长又刺激免疫系统的基因。它和其他药物的联合使用可产生叠加的抗瘤效果,目前正在进行Ⅱ期临床实验研究。在哺乳动物细胞中表达的IL-24蛋白对保持其高效的生物学活性至关重要,分泌表达的可溶性IL-24蛋白具有抗瘤功能和Th1样细胞因子样活性。为了提高重组蛋白的分泌表达水平,我们首先以全长的IL-24为研究对象,选用不同的表达载体建立了高效的哺乳动物工程细胞表达体系,可以用Western-blot方法直接检测细胞培养上清中的目的蛋白,上清中的蛋白对A375细胞的体外增殖具有显著的抑制作用,重组蛋白带有His标签,利于下一步的纯化工作。其次,通过生物模建方法获得一条三十个氨基酸残基组成的多肽,它对A375细胞体外增殖作用的显著抑制作用可被IL24抗体和IL24受体的抗体中和。本研究获得了高效分泌表达IL-24的工程细胞株和多肽,为IL-24有效地应用于临床的肿瘤治疗提供实验依据。
