甲胎蛋白作为肝细胞肝癌的重要肿瘤标志物,在肝癌靶向基因治疗中有良好应用。寻找调控AFP表达的抑制性转录因子，探讨其调控机制，不仅是开展肝脏功能基因组学研究的重要内容，而且对于提高AFP启动子靶向基因转移效率有重要意义。申请者前期研究证实新近克隆的转录抑制因子ZHX2在肝癌细胞中可抑制人AFP启动子活性，并进一步确定该基因可结合于AFP核心启动子区域，提示ZHX2对肝癌细胞中AFP的表达调控发挥重要作用。课题拟以新型蛋白组学研究手段ChIP(chromotinimmunoprecipitation)及基因突变技术为主要技术方法，研究ZHX2对肝癌细胞中AFP的特异性调控作用，并进一步探讨其分子机制，寻找抑制AFP表达的关键分子及其结合位点。该研究的完成将为阻断AFP关键抑制因子作用，从而提高AFP启动子介导的肝癌靶向基因治疗效率奠定坚实的理论基础。

RT-PCR及western blot检测肝癌细胞系和肝癌组织标本中各基因表达，发现ZHX2与AFP及GPC3表达负相关。基因转染和siRNA抑制实验证明，ZHX2可以显著抑制人肝癌细胞中AFP及GPC3的表达。EMSA及启动子突变实验发现，ZHX2通过HNF-1位点抑制AFP表达；而SP-1位点是ZHX2抑制GPC3表达所必需的。进一步研究ZHX2在肝癌发生中的作用，结果证明，ZHX2过表达可以抑制肝癌细胞体外生长和集落形成能力，而ZHX2瘤内注射显著抑制裸鼠体内肝癌的生长，提示ZHX2可能是一种潜在的抑癌基因。对ZHX2表达调控机制的研究发现，HBV转基因鼠及肝癌组织中HBV与ZHX2表达负相关；去甲基化药物5Aza处理可以增强HepG2中ZHX2表达； HBV及其片段转染肝癌细胞可以显著增强DNMTs表达，进而抑制ZHX2表达，提示HBV可以通过调控DNMTs，抑制ZHX2表达；反义封闭实验证明了这一结论。综上，课题证明ZHX2不仅可以抑制两种重要肝癌标记基因AFP和GPC3的表达，并且抑制肝癌细胞体内外生长能力，并受到HBV调控，可能在HCC发生中发挥重要作用。