MLCK调控的MLC磷酸化在缺氧上皮细胞紧密连接及屏障通透性调控中起着关键作用，但MLCK的调控尤其是转录调控机制尚不清楚。本项目在目前在研项目研究缺血缺氧时HIF-1α调控肠上皮细胞MLC磷酸化所介导的细胞紧密连接相关蛋白及屏障通透性的基础上，探索缺氧肠上皮细胞HIF-1α、MLCK表达变化规律及HIF-1α对MLCK基因转录调控的影响；通过克隆MLCK基因启动子、构建MLCK报告基因载体,探索HIF-1α对缺氧肠上皮细胞MLCK启动子的调控作用，并采用ChIP技术分析HIF-1α与MLCK基因启动子的结合特性。通过本项目的研究，将率先从MLCK基因转录水平来阐明缺氧上皮细胞MLCK对MLC磷酸化调控的分子机制；首次明确提出MLCK是HIF-1α靶基因及HIF-1α调控缺氧上皮细胞MLCK基因转录的新观点，对深入阐明HIF-1α调控缺氧上皮细胞屏障通透性的分子机制具有十分重要的意义。

MLCK调控的MLC磷酸化在缺氧肠上皮细胞屏障功能的调控中起着关键作用，但MLCK的调控尤其是转录调控机制尚不清楚。本项目首先探索缺氧肠上皮细胞HIF-1α及MLCK表达变化规律，并通过特异性诱导HIF-1α表达、转染HIF-1α基因及沉默HIF-1α基因等技术方法，研究高表达HIF-1α及沉默HIF-1α基因对肠上皮细胞MLCK基因表达的影响，以初步明确HIF-1α对缺氧肠上皮细胞MLCK基因转录的调控作用。结果表明，缺氧及HIF-1α特异性诱导剂均引起HIF-1α蛋白表达显著增加，且伴有MLCK蛋白表达增加，但MLCK mRNA表达无明显变化。经转染含人HIF-1α全长cDNA的质粒来高表达HIF-1α基因能引起HIF-1α蛋白表达明显增加，但对MLCK mRNA表达无显著影响。siRNA方法沉默HIF-1α基因能明显抑制缺氧引起的HIF-1α蛋白增加，但MLCK mRNA表达无显著变化。综合上述结果，我们初步认为HIF-1α可能通过MLCK基因转录后的过程而参与缺氧肠上皮细胞MLCK蛋白表达的调控。此研究对深入阐明HIF-1α调控缺氧肠上皮细胞屏障功能的分子机制具有重要学术意义。