本课题拟采用构建杂交瘤细胞、Western Blot、间接免疫双荧光法、RNA干扰技术、基因芯片检测、凋亡抗体芯片检测等技术方法，系统研究凋亡相关基因PNAS-2及其蛋白的功能；得到PNAS-2蛋白的抗体；在蛋白质水平检测PNAS-2在初发、复发、缓解急性白血病及非白血病病人中的表达差异以进一步验证定量PCR结果；明确PNAS-2蛋白在亚细胞水平的具体定位并进一步了解其在急性白血病及非白血病病人中是否存在蛋白定位差异；了解PNAS-2基因及蛋白如何参与细胞凋亡，明确其在凋亡通路中的定位。其结果将进一步明确PNAS-2基因及蛋白与急性白血病发生、发展的关系；完善急性白血病发病机制学说；补充现有细胞凋亡通路学说；并为急性白血病的靶向治疗提供了新的靶点，具有广泛地理论与临床应用价值。

在本课题中我们成功构建了杂交瘤细胞，得到PNAS-2蛋白的特异性单抗；应用Western Blot技术，发现PNAS-2蛋白在白血病细胞株、初发及复发急性白血病患者中的表达明显高于293T细胞、缓解的白血病患者及非白血病患者；应用间接免疫双荧光法，发现PNAS-2蛋白在白血病细胞株、初发及复发急性白血病患者中的亚细胞水平的定位与293T细胞、缓解的白血病患者及非白血病患者明显不同，前者中PNAS-2蛋白表达量高，且弥散分布整个胞浆，后者中基本都定位于细胞核周围，有些细胞中的表达几乎都微不可见；通过RNA干扰技术、基因芯片检测、凋亡抗体芯片检测等技术方法，发现了PNAS-2基因及蛋白参与细胞凋亡的机理，明确其在凋亡通路中的定位：PNAS-2蛋白通过抑制细胞溶酶体内的CatD和GraB的释放从而分别抑制AIF介导和GraB－Perforin介导的细胞凋亡。在研究中我们还发现PNAS-2通过抑制抑癌基因及GraB－Perforin通路参与肿瘤发生、发展；此外，我们发现PNAS-2高表达可能通过促使细胞快速通过G2/M期而抑制白血病细胞发生凋亡。