中文摘要
对虾是我国海水养殖的主要对象,但是深受WSSV等病原的巨大威胁。本实验室以往研究发现,对虾的小G蛋白(Rab和Ran)、Caspase及QM蛋白分别在对虾的三个主要免疫反应即细胞吞噬、细胞凋亡和酚氧化酶原系统起重要作用。因此,在原有的基础上本项目进一步研究WSSV病毒蛋白对这几个对虾免疫相关基因的调控。首先利用本实验室前期工作中初步建立的对虾BAC文库获得对虾免疫相关基因的表达调控DNA序列,并在昆虫细胞中验证其启动子功能;然后利用免疫相关基因的调控DNA筛选与之结合的WSSV病毒蛋白,并验证WSSV病毒蛋白对对虾免疫相关基因的调控作用;最后就WSSV病毒蛋白与对虾免疫相关基因互作在对虾免疫中的作用进行研究,以期在分子水平上深化对病毒与宿主相互作用的机制的了解,这对于培育抗病养殖品种、有效防治养殖病害的发生具有重要意义,同时为海洋无脊椎动物的分子免疫学和免疫遗传学研究提供借鉴。
结题摘要
对虾是我国海水养殖的主要对象,但是深受WSSV等病原的巨大威胁,至今没有有效的防治方法。本项目从对虾的四个重要免疫相关基因Rab和Ran、Caspase以及QM出发,研究WSSV病毒蛋白对对虾免疫应答的调控。首先采用染色体步行的方法,获得Rab和Ran、Caspase和QM基因的5'端上游序列,长度分别为180bp、827bp、678bp和307bp。将获得的序列在昆虫细胞中验证其启动子功能,发现Ran和Caspase的上游序列有启动子功能。将Ran和Caspase的调控区DNA进行亲和素标记,然后与链霉亲和素修饰的磁珠结合,通过下拉发现Ran基因的启动子序列与对虾的Actin和Ran蛋白结合,Caspase的启动子序列能与病毒的VP38 和VP41B蛋白结合。通过荧光素酶报告基因发现VP38和VP41B对PjCaspase启动子分别有抑制和激活作用,而对VP38和VP41B基因进行过量表达和RNAi抑制后,发现WSSV感染后这两个WSSV蛋白对对虾血细胞凋亡有调控作用。本项目研究结果为无脊椎动物的免疫机制增添了新的内容,也为对虾病害防治提供了基础。
