本课题拟利用酵母杂交和免疫沉降技术, 对卵巢癌细胞中接合物蛋白CrkL的靶向结合蛋白进行筛查和鉴定。同时利用可调节性RNA干扰技术,构建可控性及特异选择性CrkL缺失表达型的卵巢癌细胞SKOV3和MCAS, 通过对其靶向效应酶活性,细胞活力,细胞动力等生物学表型进行检测，并与Crk缺失型细胞(见工作基础)比较, 以期能证明我们的推测：细胞信号传导分子CrkL通过其特异的细胞内信号调节通路,主要控制与细胞基本生存相关的生物行为,一旦表达缺失,会对卵巢癌细胞产生致命效果。意义:如果能得到预期结果, 我们将在下一个课题里进一步阐明CrkL分子对不同生理性增殖状态细胞的意义(期望能证实这种致命效应只针对癌细胞,正常胚胎细胞而非成体正常细胞), 从而为客观评定其作为卵巢癌生物靶向治疗药物的有效性和安全性提供理论证据。

项目原本是以细胞实验为基础的，通过免疫沉淀和siRNA技术，分别阐明了接合物蛋白Crk和CrkL在卵巢癌细胞SKOV3及MCAS中与其下游蛋白Dock180, C3G之间存在不同的选择优势，以及靶向抑制二者表达后，两种卵巢癌细胞的细胞表型改变表现出不同的转归: Crk表达抑制细胞表现出浸润，增殖等恶性生物学行为能力的减低，但仍保留生存活力,同时明确了Crk在卵巢癌细胞恶性浸润能中的作用是通过Crk/Dock180/Rac1信号途径发挥功能；对此结果的总结文章投稿并被录用。而CrkL表达缺失性细胞则表现出凋亡和生存能力的丧失。由此我们得出结论，接合物蛋白CrkL与其细胞同源物Crk在卵巢癌细胞中因不同的结合优势，从而分别承担不同的功能。 不过外投文章的评阅人提出意见，指出这样的结论如果能在组织学上提供相对大样本的资料作为的证据，才能更有说服力，因此我们通过较大量的组织切片行免疫组化检测两种接合物蛋白的表达水平，同时收集了部分新鲜病例组织用免疫印迹法测定蛋白表达水平，这些补充数据印证了我们在卵巢癌细胞中得出的结论。文章正在退修中。(Molecular Carcinogenesis)