日本乙型脑炎病毒是一种重要的人畜共患传染病病原，外膜蛋白（PrM/M）、囊膜蛋白（E）和非结构蛋白1（NS1）是对该病毒生物学活性具有重要作用的三个蛋白，决定了病毒复制与成熟、细胞融合、组织嗜性、毒力、免疫保护力等重要属性。同时，日本乙型脑炎病毒的PrM、E、NS1蛋白均为糖蛋白，共包含4个N-糖基化位点，糖基化修饰对这三个蛋白功能的影响有待研究，对病毒生物学活性的作用有待阐明。本项目拟通过反向遗传操作，在DNA水平上对上述4个位点进行点突变以消除糖基化修饰，对拯救的病毒在感染性、毒力、免疫原性、组织嗜性以及蛋白细胞内定位和转运等方面与亲本毒株进行对比，研究消除糖基化修饰后日本乙型脑炎病毒上述生物学活性的变化，揭示N-糖基化修饰在日本乙型脑炎病毒中的生物学功能，为N-糖基化修饰功能机制的深入研究奠定基础，为该病毒分子致病与免疫机理研究、药物和疫苗分子设计提供思路。

日本乙型脑炎病毒是一种重要的人畜共患病病原，其prME和NS1蛋白是重要的功能蛋白，且均是N-糖蛋白，N糖基化修饰在病毒中的作用未知。本项目通过点突变法构建了不同N糖基化位点缺失的突变蛋白，并对突变蛋白的定位、折叠、组装、细胞毒性、免疫保护等进行了系统的评价。研究结果发现，E蛋白中的N糖基化位点突变后，其折叠效率降低，但仍能折叠形成天然状态，也能组装形成病毒样粒子。而prM蛋白中的N糖基化位点缺失后，不仅会导致E蛋白折叠的完全失败，且使prM-E不能组装成病毒样粒子。prM和E中糖基化位点的缺失，均可造成其向胞外分泌和细胞毒性的降低。用糖基化突变的prME和NS1基因免疫小白鼠，发现单个糖基化缺失后，免疫原性和保护力提高，而两个糖基化位点同时缺失后，则造成免疫保护性的降低。同时，通过酶切或抑制病毒糖链合成，发现病毒的感染或复制能力大大降低，说明糖基化在病毒的侵染和复制过程中也具有重要的作用，可作为一种乙型脑炎的治疗手段。