中文摘要
现代研究表明受精卵极性重建过程中各种特异性细胞质组分被运送到特定位置是借助于细胞内设计精密的分子马达完成的。因此,对这一类蛋白的结构、生化活性、生物学功能及其调控机理的深入研究无疑是探讨胚胎发育过程中极性建立机制的突破口。本项目拟从研究本实验室新近分离的驱动蛋白(Kinesin)家族新基因入手,通过研究该基因编码驱动蛋白的微管依赖的ATP水解活性及其调控的酶促反应动力学,观察驱动蛋白在微管上的运动
结题摘要
对烟草不同时期胚cDNA文库差异筛选克隆得到的一个新基因(NtKrp)编码驱动蛋白的ATPase活性及调控机制做了初步的研究,内容包括:1、研究了重组NtKrp基因编码驱动蛋白马达域(Kin556)微管依赖的ATP水解反应的动力学特征,确认NtKrp为Kinesin家族的一个成员。2、以基因枪为手段,分析具有GFP荧光标记的全长、马达域、尾部结构域及尾部苏氨酸位点发生突变或缺失的重组蛋白在洋葱表皮细胞中的亚细胞定位。结果表明尾部序列中的苏氨酸对NtKrp蛋白的定位有着决定性的作用。苏氨酸的磷酸化可能在NtKrp蛋白活性调控机制中起着重要的作用。3、采用荧光共振能量转移技术(FRET)对NtKrp蛋白的构型与缓冲液组成,如盐浓度、变性剂浓度等的关系进行了研究。结果表明在生理盐浓度条件下,NtKrp生化活性的调控需要其它因子的参与。4、采用差示扫描量热法对Anti-sense转基因和野生型烟草种子的表型进行了研究,并以BSA为模型研究了蛋白浓度及外加化学物质对蛋白热变性聚集过程的影响。实验结果对了解该家族蛋白在植物生长发育过程中的重要作用提供了生物化学方面的依据。
