中文摘要
病毒受体是决定病毒宿主嗜性的主要因素。口蹄疫病毒(FMDV)自然条件下仅感染猪、牛、羊等偶蹄动物而不感染人类。已经证实四种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8可作为FMDV的受体。与人源整联蛋白相比较,FMDV 能更加有效地利用牛源整联蛋白。猪源整联蛋白的研究至今未见报道。本研究拟从人、牛、猪源细胞中克隆FMDV整联蛋白受体基因,将其克隆到表达载体并转染FMDV非允许细胞,分别构建表达人、牛、猪源单个受体的细胞模型,选用对猪和牛不同致病力的FMDV株感染这些细胞,分析病毒的复制效率区分不同物种来源的受体在介导病毒感染过程中的异同,然后通过构建表达嵌合整联蛋白的细胞模型找到影响病毒嗜性的结构域,明确整联蛋白与FMDV宿主嗜性的关系,预测FMDV感染人类的可能性和危险性。本研究不仅可以丰富FMDV现有的受体理论研究,而且将为深入研究FMDV的致病机理和跨种间感染奠定基础。
结题摘要
病毒受体是决定FMDV致病机理的主要因素。研究已发现αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8四种整联蛋白和硫酸乙酰肝素是FMDV的细胞受体,目前认为FMDV主要利用整联蛋白受体感染猪、牛、羊等易感动物。本项目利用分子生物学技术克隆到了人和猪、牛、羊、双峰驼、单峰驼和瞪羚等动物的24个FMDV受体亚基基因并进行了序列特征和遗传进化关系分析。结果显示,不同动物受体亚基的序列差异在一定程度上可能决定了FMDV的宿主范围。利用常规方法制备了一系列针对不同整联蛋白亚基配体结合域的抗体,免疫组化和荧光显微共聚焦实验表明,偶蹄动物整联蛋白αvβ6在舌皮、鼻内粘膜、唇、软腭、牙龈、咽喉等FMDV易感组织上皮细胞的表达呈阳性;构建了一批分别表达单个FMDV受体基因的重组质粒和细胞系,为深入研究FMDV受体和致病机制奠定了基础;建立了检测牛、猪、羊、双峰驼等偶蹄动物FMDV受体亚基mRNA在不同组织中转录水平的实时定量RT-PCR方法,研究结果提示,αvβ6和αvβ8受体的组织分布与FMDV感染初期的组织嗜性相似,可能是决定FMDV宿主范围和组织嗜性的主要功能受体。
