乙型脑炎是一种重要的人兽共患传染病。高致病性蓝耳病是一种严重危害养猪业的烈性传染病。常规疫苗的局限性凸显开发新型疫苗的必要性。.本项目拟构建基于乙型脑炎病毒复制子载体的猪高致病性蓝耳病疫苗，在细胞水平检测复制子疫苗的表达情况，然后在猪体内通过体液免疫、细胞免疫、粘膜免疫及攻毒保护试验进行免疫效力的综合评价；另外，在乙脑病毒样颗粒的研究中，先筛选出四环素诱导调控的稳定表达乙脑结构蛋白的细胞系BHK-Tet-Off-CME，然后将乙脑复制子载体电转染到该细胞系，包装出的乙脑病毒样颗粒感染Vero细胞测定滴度，后续实验中既可以作为疫苗也可以作为检测抗原。该项目的实施有望为乙型脑炎和高致病性蓝耳病的防控提供有力的支持，具有重要的经济效益和社会影响。

乙型脑炎和高致病性蓝耳病是两种重要的烈性传染病。成功构建基于DNA水平的JEV复制子载体系统（pJEV-REP）的基础上，构建了共表达PRRSV GP5和M蛋白的复制子疫苗（pJEV-REP-G-2A-M和pJEV-REP-G-2A-M-IRES），在细胞水平上可以高效复制和表达。免疫小鼠后的结果表明，与DNA疫苗组相比，复制子疫苗组均能产生更高的特异性抗体和更强的淋巴细胞增殖效应，展现出良好的体液免疫和细胞免疫应答能力。在乙脑病毒样颗粒的研究中，成功筛选出基于Tet-on advance系统表达乙脑病毒PrM/E的细胞系J32#24-1。用Dox诱导后，电镜下可以看到直径约30nm的粒子，激光共聚焦显E蛋白主要在内质网富集；转染复制子载体后，可以产生包装出具有"一过性感染"能力的病毒样颗粒。免疫小鼠后，可以检测到特异性抗体，血清中和抗体滴度为1:128。免疫28天后，用100LD50的乙脑强毒攻毒，免疫"一过性感染"VLPs和常规VLPs组小鼠均有85%的保护率，商品化疫苗的保护率为100%。该项目的实施有望为乙型脑炎和高致病性蓝耳病的防控提供有力的支持，意义重大。