中文摘要
绵羊种布鲁氏菌019株是我国最早分离、鉴定的绵羊附睾型布鲁氏菌。在国家自然基金的支持下,前期已用酵母双杂交方法获得与019株VirB2、VirB5表面蛋白作用的捕获蛋白。本研究拟采用免疫共沉淀方法准确验证绵羊种布鲁氏菌019株VirB2、VirB5表面蛋白与巨噬细胞捕获蛋白的相互作用,随后针对捕获蛋白cDNA序列,设计RNA干扰片段,构建RNA干扰质粒,转染绵羊巨噬细胞,用绵羊种布鲁氏菌019株侵染转染后的绵羊巨噬细胞,考察这些捕获蛋白在布鲁氏菌侵染过程中的功能,为进一步揭示布鲁氏菌胞内寄生的分子机理和布鲁氏菌病药物靶点的选择提供科学依据。
结题摘要
通过Co-IP得出:绵羊种布鲁氏菌VirB2、VirB5、OMP31与巨噬细胞蛋白趋化因子配体2 (CXCL2)、含铁素重链多肽(FTH1)、特异性乳糖苷凝集素(GSL)有相互作用;RNA干扰、荧光实时定量PCR、扫描电镜、ELISA细胞因子检测等实验表明:FTH1表达受阻抑制了布鲁氏菌对巨噬细胞的入侵和胞内寄生,并促进感染细胞的凋亡进程;GSL基因表达抑制,布鲁氏菌胞感染能力增强,导致感染细胞的坏死程度加快;敲除布鲁氏菌VirB2后,,布鲁氏菌的毒力降低,刺激机体分泌IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和TNF-α的能力低于亲本株。在本项目的资助下,共培养了3个研究生,有1名学生评为石河子大学优秀毕业生,有1篇硕士研究论文为石河子大学优秀论文,标注有国家自然科学基金(编号:30800813)发表的论文8篇,收录2篇,其中包括4篇中文核心期刊,1篇SCI文章,超额完成本项目预期的任务。
