鸡胚性腺发育是一个复杂的生物学过程，其性别决定和性分化机制目前尚不清楚。近年来研究表明miRNA在转录后水平对动物许多发育过程起着精细的调控作用，而它是否参与鸡胚性腺发育的调控至今还未有报道。针对这一现状，本项目拟采用miRNA芯片技术分离性分化过程中在雌、雄鸡胚性腺呈差异表达的miRNA，用Northern blot、荧光定量PCR和整体原位杂交技术研究分离到的miRNA时序及组织定位表达模式，并对miRNA序列特征、染色体定位及作用靶点进行分析；然后结合生物信息学与定量PCR、异位表达等实验方法鉴定特定miRNA的靶基因，分析候选miRNA的基因调控网络。通过性分化相关候选miRNA的分离及鉴定，本项目将初步探明miRNA在鸡性腺性分化过程的调控作用，为从全新的角度解析鸡性别决定与性分化分子机制提供科学依据，为鸡性别控制研究提供理论基础。

为研究miRNA是否参与鸡胚性腺发育的调控，本研究先采用miRNA芯片和Solexa测序技术分离了性分化过程在雌、雄鸡胚性腺中呈差异表达的miRNA，用半定量及荧光定量PCR和整体原位杂交（WISH）方法进一步研究了差异表达显著miRNA的时空表达谱，然后对新miRNA进行了序列特征分析和染色体定位，以及对候选miRNA的作用靶点进行了生物信息学预测和实验验证。结果表明，在鸡胚性分化过程中存在着一大批性别差异表达miRNA，所研究的15个miRNA在E3.5-6.5鸡胚性腺中呈雄性或雌性高表达；利用新建立的WISH法检测结果显示miR-363、200b、1810和92在鸡胚早期性腺或性腺/肾脏中表达，且两性中呈差异表达；预测了miR-1810、92和107调控的与性腺发育相关的靶基因，并结合荧光素酶报告基因法验证了miR-92与性分化相关基因ATRX的调控靶位点；一批鸡新miRNA被定位到鸡染色体上，通过它们在基因组的前后翼序列进行了miRNA前体的二级结构分析。本研究结果提示了miRNA在鸡性腺性分化过程中起着重要的调控作用，为进一步研究miRNA如何调控鸡性腺发育过程奠定了基础。