中文摘要
提高肌内脂肪含量是改善猪肉品质的主要途径,选育提高肌内脂肪含量应尽量避免或减少对机体其它脂肪组织的影响,其关键是找到特异性调控肌内前体脂肪细胞分化的基因。近年的研究表明,肌肉组织和脂肪组织前体脂肪细胞的分化机制存在着差异,这种差异的存在为寻找这些特异调控基因提供了理论依据。.本项目拟开展的研究工作主要包括3个方面:(1)建立猪肌肉组织和脂肪组织前体脂肪细胞的分离培养和诱导分化体系,比较相同诱导条件下两种前体脂肪细胞分化能力和分化效果的差异;(2)通过基因芯片技术比较两种组织前体脂肪细胞分化过程中基因表达的差异,通过定量PCR验证基因表达的差异;(3)选择5-10个候选基因,构建siRNA表达载体,通过RNA干涉技术研究候选基因功能。通过上述研究,旨在找到肌肉组织中前体脂肪细胞分化的特异性调控基因,为猪肌内脂肪标记辅助选择技术以及特异性调控技术的开发提供理论依据。
结题摘要
本项目采用基因芯片、差异显示以及定量分析等方法筛选猪肌内脂肪细胞特异性调控基因,在此基础上对候选基因的结构及其在肌内脂肪形成中的功能进行了研究。主要研究结果:(1)通过成熟脂肪细胞去分化技术获得了单一的肌肉和脂肪组织前体脂肪细胞,DMI诱导或自分化能够再形成成熟脂肪细胞。(2)肌肉前体脂肪细胞比脂肪前体脂肪细胞具有更强的分化能力,前者在脂滴形成以及分化和代谢关键基因表达方面均呈现较高水平。(3)基因芯片分析表明皮下脂肪细胞与肌内脂肪细胞基因表达模式存在较大差异,两者在脂质代谢、胰岛素信号途径等多个代谢途径和信号转导途径存在显著差异。(4)采用差异显示RT-PCR技术获得14条与肌内脂肪含量相关的EST序列,鉴定出两个功能基因SFRS18和NCOA1。(5)获得猪SFRS18基因以及P160家族NCOA1、NCOA2、NCOA3基因的全序列,对其基因结构进行了分析,证实了4个基因与肌内脂肪含量相关。(6)在PPARG基因调控序列鉴定出一个突变单倍型,对该基因的表达水平和肌内脂肪含量有显著影响。(7)在KDR基因调控序列鉴定出一个突变单倍型,对该基因的表达水平和肌内脂肪含量有显著影响。
