中文摘要
人巨细胞病毒是引起先天感染和出生缺陷的主要病原微生物之一,我国每年约有4万新生儿因人巨细胞病毒先天感染而出现各种畸形。减少人巨细胞病毒危害的关键在于揭示其先天感染的致畸机理,对病毒UL/b'区基因的研究是国际学术重要研究方向之一。目前,UL/b'区预测基因是否均具有编码蛋白质能力?转录的mRNA结构如何?均缺少实验研究证据。本课题组在完成UL/b'区基因多态性研究的基础上(国家自然科学基金课题:30170986),拟采用cDNA探针杂交和RT-PCR技术研究新分离病毒株中UL/b'区各预测基因mRNA转录情况,证明UL/b'区各预测基因是否真正具有编码蛋白的能力,并探讨在UL/b'区是否存在新的基因;采用cDNA克隆测序技术研究可转录基因的mRNA结构。本课题的完成将为人巨细胞病毒基因结构提供重要基础资料,对最终解决人巨细胞病毒先天感染的防治、减少先天畸形儿出生等重大医学问题具有重要意义。
结题摘要
人巨细胞病毒UL/b'区基因多态性已经得到了较充分的研究,但仅有个别基因在转录和mRNA结构方面进行了研究。为了证实HCMV UL/b'区各个预测基因是否转录?搞清转录的mRNA结构,发现可能存在的新基因,本项目构建了两个人巨细胞病毒临床分离株全基因组的cDNA文库,并进行了UL/b'区各预测基因cDNA克隆的筛选和测序分析,同时,采用RACE技术分析了相关基因转录的mRNA结构,进一步采用Northern技术验证上述两种技术得到的mRNA结构。研究结果证实,除UL134和UL137外,这一基因区域的其它预测基因在病毒感染过程中均被转录;各个基因转录的mRNA结构表现出多样性,同一基因区域存在多种转录本;并且在HCMV中发现了AntiUL83, AntiUL87,AntiUL31和AntiUL139等四个新反义转录本的存在。本项目揭示了HCMV UL/b'区基因的转录情况和转录的mRNA结构,为HCMV致病机理研究提供了十分重要的基础资料,对全面了解HCMV基因结构、揭示病毒致病机理具有十分重要的学术意义。本项研究已发表SCI收录杂志论文2篇,标志着我国在这一研究领域居于世界前沿。
