人工肝特别是生物人工肝支持系统是有效缓解肝衰竭患者病情的重要手段，也是有望解决肝移植供体短缺的重要途径；而肝细胞源问题则是制约生物人工肝支持系统发展和使用的最大障碍。本项目拟构建SV40T/PcDNA3.1重组质粒并采用脂质体转染法将SV40Ltaq基因转染至胚胎肝细胞，筛选获得具有连续传代培养能力并保持肝细胞形态学特征的阳性克隆；再以高效液相色谱仪检测其细胞色素氧化酶P4503A4活性证明其具有

人工肝特别是生物人工肝支持系统是有效缓解肝衰竭患者病情的重要手段，也是有望解决肝移植供体短缺的重要途径。课题组经对人和猪原代肝细胞分步灌流分离技术的优化，成功建立了人胚胎肝细胞分步灌流分离和程序性冷冻复苏的新方法。采用标准操作程序以分离获得的约克夏种成年白猪肝细胞为生物材料制备了猪肝亚细胞系统，并对其进行了特征化研究，发现其具备类似人肝细胞CYP450 1A2、2A6和3A4的酶代谢活性，并在两种不同的辅酶系统中显示出类似CYP450 3A4的代谢活性，在辅酶系统I中猪肝亚细胞系统的睾酮6?β羟基化反应活性显著高于在辅酶系统II中，前者中的最大反应速度(Vmax)约为在后者中的6倍。猪肝亚细胞系统37℃孵育60分钟可代谢约25%的游离胆红素(400uM)，且其转化产物能够被β-葡糖苷酸酶水解。采用脂质体转染技术，将构建的SV40 gp6真核表达质粒SV40T/PcDNA3.1转染原代培养的人胚胎肝细胞，SV40T单克隆抗体进行免疫荧光检测表明目的基因可在人胚胎肝细胞瞬时表达。未能获得可持续传代的转染人胚胎肝细胞。