中文摘要
转录因子Oct-4是影响胚胎干细胞发育全能性的关键因子之一。利用GST融合蛋白亲和层析寻找与Oct-4 相互作用的蛋白质时，我们发现一个与Oct-4相互作用的新蛋白-Wwp2。实验证明Wwp2具有蛋白泛素化连接酶E3的活性，对维持Oct-4蛋白水平在正常范围起重要作用，可能参与Oct-4对胚胎干细胞功能的调节。Wwp2很可能是与多种细胞，尤其是胚胎干细胞生长、分化及凋亡密切相关的重要蛋白质有关。我们利用GST-Wwp2融合蛋白体外亲和层析和蛋白质谱技术发现了新的与Wwp2相互作用的蛋白-Alix，已有研究表明它参与细胞凋亡过程。本项目拟继续深入研究1）Wwp2对Alix功能调节的分子机制；2) Alix对胚胎干细胞增殖和凋亡的调节；3) Wwp2对Alix参与的细胞和凋亡过程的调节。对这些问题的研究将有助于阐明Wwp2对细胞重要生命过程的调节机制及胚胎干细胞凋亡调节的分子机制。
结题摘要
胚胎干细胞具有无限增殖和分化成成体各个种类细胞的能力。我们研究了一个T-box家族的全能性转录因子Tbx3在调控胚胎干细胞自我更新和分化的作用。我们发现Tbx3被全能性因子Stat3, Oct4, Nanog和Sox2直接调节。通过建立Tbx3过表达和RNAi的诱导系，我们发现过表达Tbx3引起原始内胚层的分化，反之，RNA干扰Tbx3的表达则阻碍了正常的原始内胚层分化，同时也影响了胚胎干细胞的自我更新能力。通过基因芯片我们研究了Tbx3调控的下游基因，进一步我们发现Tbx3直接调控了原始内胚层分化相关基因Gata6的表达，阐述了可能的机制。