中文摘要
从mRNA和蛋白质水平阐明新克隆的细胞膜相关蛋白,dystrophin基因家族新成员dystrotelin在氧化应激损伤的心肌细胞模型,大鼠心肌缺血-再灌损伤模型中的时空表达模式;采用基因转染,反义寡核苷酸技术来探讨Dyt的过表达/表达抑制对心肌细胞抗损伤的影响及其量效关系;构建Dyt绿色荧光表达载体,观察该荧光蛋白在正常/应激状态下的心肌细胞的亚细胞定位;采用酵母双杂交系统,亲和层析,免疫共沉淀,免疫荧光方法筛选出Dyt在正常/应激,过表达/表达抑制状态下结合的蛋白,分析它们的生物学功能。开展本研究可望阐明新的细胞膜相关蛋白Dyt在心肌细胞损伤过程的变化和其可能的抗心肌损伤的机制。并期望进一步揭示以dystrophin为代表的细胞膜相关蛋白抗心肌损伤的分子机制,为心肌细胞抗损伤的防治和心肌抗损伤的治疗提供新线索和新思路。
结题摘要
Dystrotelin是课题组在研究dystrophin基因家族时克隆的一个新基因,使用realtime-RT-PCR,获得dystrotelin的基因表达谱,证实该基因在大脑和心脏中有高表达,组织进行免疫组化结果显示:dystrotelin 蛋白在骨骼肌神经肌肉接头间隙处呈高表达。不同缺血时间的小鼠心肌组织基因和蛋白表达结果显示:蛋白随着缺血时间的延长呈现进行性下降;增加/减少dystrotelin在H9C2细胞的表达量可减少/增加该细胞于氧化应激状态的死亡率,证实该基因具有心肌保护作用。构建了Dystrotelin氨基与羧基端的诱饵质粒,使用酵母双杂交,获得相互作用蛋白Rabaptin5,构建dystrophin羧基端诱饵质粒,运用酵母双杂交,获得相互作用蛋白myomegalin.
