本课题前期工作基础是我们关于凝血酶对水通道蛋白4影响的研究。我们在国际上首次发现凝血酶在体外通过抑制水通道蛋白4表达，并发现蛋白激酶C起中间环节作用。本课题主要观察脑出血时血肿成份对水肿和水通道蛋白4的影响，并利用基因敲除小鼠研究血肿成份产生水肿的机制；并为进一步探讨血肿成份干预脑出血灶周水通道蛋白4表达的分子机制，重点研究星型胶质细胞膜上关键转录因子的调控作用，试图从转录调控因子水平来分析血肿成份对脑出血水肿作用及其分子机制；我们应用蛋白免疫印迹、荧光定量PCR研究水通道蛋白4表达改变；应用蛋白/DNA芯片筛选调控水通道蛋白4表达关键转录因子，应用荧光素报告基因分析血肿成份作用后脑细胞内关键转录调控因子的改变，进而采用RNA干扰技术对筛选出的转录因子进行功能研究，明确其在调控水通道蛋白4及脑水肿的分子生物学机制。

目的：研究脑出血后主要血肿成份凝血酶对AQP4的作用及其机制。方法：立体定向注射全血和凝血酶至脑内，检测AQP4表达。在原代培养的星形胶质细胞基础上验证凝血酶对AQP4表达的影响；使用工具药H7, TPA , SFLLRN研究凝血酶对AQP4表达影响的信号通路。结果：凝血酶以时间依赖和剂量依赖方式抑制AQP4表达。Cathepsin G等工具药预处理增加了AQP4表达。转录因子Sp1被蛋白/DNA芯片所筛查出，并被EMSA法验证。突变Sp1位点可消除凝血酶对AQP4的抑制效果。凝血酶减少了Sp1蛋白的表达和磷酸化水平。应用RNA干扰技术发现下调Sp1的表达和活性后使凝血酶几乎丧失抑制AQP4表达的作用。结论：AQP4参与脑出血后水肿的形成。凝血酶抑制AQP4表达的作用是由PKC通路介导。活性差异转录因子Sp1的活性、蛋白表达基磷酸化水平与肝癌转潜能密切相关。Nxm抑制AQP4表达主要是通过下调转录因子Sp1的表达或磷酸化，从而抑制其与AQP4启动子结合的活性而完成的。