本实验室以往的研究已证实CCK-8在神经系统可通过CCKB受体参与阿片耐受，但其作用的分子机制一直不很清楚。本项目预实验证实CCKB受体和mu受体在正常大鼠神经系统有很好的共分布及聚合现象，在转染的COS7细胞中用BRET也可检测到明显的聚合体。据此提出假设：CCKB受体与mu受体形成的异源多聚体是CCK-8参与阿片耐受的分子机制之一。本项目将构建稳定转染CCKB受体和mu受体的细胞株，用免疫共沉淀、受体内化及相关蛋白激酶分析、cAMP及钙离子浓度测定、受体基因突变等确定CCK-8通过CCKBR参与阿片耐受的分子机制。同时还将在吗啡耐受大鼠中进一步检测CCKB受体和mu受体的共分布、共沉淀现象，最后在吗啡耐受的细胞模型中通过免疫共沉淀、受体内化及相关激酶分析、钙信号测定等验证稳定转染细胞系中所得到的分子机制。