中文摘要
Dynein和CDC42的功能异常会导致生理异常和疾病,Nudel能调节dynein和CDC42两个通路。NudE具有与Nudel相似的性质而功能差别不明。以往Nudel/NudE的研究主要集中在细胞层面,缺乏动物体水平的探索。我们拟利用基因剔除小鼠研究Nudel在组织和个体中发挥的重要功能及其与NudE的功能差别。我们已获得表达突变体的Nudel基因剔除小鼠,拟利用杂合子小鼠研究Nudel在神经和生殖等方面的功能;由于剔除小鼠纯合子胚胎期致死,拟在剔除小鼠的基础上构建Nudel过表达的rescue小鼠(外源表达元件两侧带有LoxP位点),通过慢病毒介导的Cre表达,在特定组织内剔除Nudel同时表达其不同磷酸化形式突变体研究其功能机制;构建Nudel基因剔除NudE过表达的rescue小鼠研究NudE与Nudel的功能差别。通过这些研究功能,为神经和生殖等方面的疾病提供理论依据。
结题摘要
发现Nudel 基因剔除杂合子小鼠随月龄的增加逐渐显现出运动神经元病- - 脊髓侧索硬化症的症状(论文正在撰写中)。通过冰冻切片免疫染色和Nudel 基因剔除小鼠杂合子胚胎半乳糖苷酶染色发现Nudel 在背根神经节的感觉神经元中富集表达。背根神经节中的感觉神经元中进行体外培养,将Nudel 的多克隆抗体注射入感觉神经元中封闭Nudel 的生理功能导致轴突中dynein 介导的向神经元胞体侧膜泡运输终止,神经元内内吞溶酶体(endo - lysosome)的形成也显著延迟。这一研究为解释dynein 活性受损后引起的疾病发生提供了重要的知识积累。
