中文摘要
氨基酸能否直接调控蛋白质基因表达是营养药理学和分子营养学的重要课题。我们已在细胞水平证实谷氨酰胺(GLN)能通过调控杯状细胞分化,促进肠三叶因子(ITF)合成,但其分子机制尚不清楚。本研究首先选取与杯状细胞分化密切相关的一个ITF启动子:"杯状细胞特异性沉默抑制子"(GCSI)作为研究靶点,通过对其进行点突变,转染细胞后观察在GLN的刺激下,报告基因活性的变化,以明确GLN诱导杯状细胞分化,调控ITF表达的作用是否与之相关。若相关,将采用EMSA等手段获取与CCSI结合的核蛋白,并对其进行初步分析。若与GCSI无关,则对ITF另外两个启动子:"杯状细胞反应元件"(GCRE)和"ITF增强反应元件"(IERE)进行分析,观察在GLN的刺激下,是否有特异的核蛋白与之结合,并对获取的核蛋白进行初步分析。该研究对阐明GLN调控蛋白质基因表达的分子机制以及寻找特异的GLN反应元件都具有重要的理论意。
结题摘要
氨基酸能否直接调控蛋白质基因表达是营养药理学和分子营养学的重要课题。我们已在细胞水平证实谷氨酰胺(GLN)能通过调控杯状细胞分化,促进肠三叶因子(ITF)合成,但其分子机制尚不清楚。本研究首先选取与杯状细胞分化密切相关的一个ITF启动子:"杯状细胞特异性沉默抑制子"(GCSI)作为研究靶点,通过对其进行点突变,转染细胞后观察在GLN的刺激下,报告基因活性的变化,以明确GLN诱导杯状细胞分化,调控ITF表达的作用是否与之相关。若相关,将采用EMSA等手段获取与GCSI结合的核蛋白,并对其进行初步分析。若与GCSI无关,则对ITF另外两个启动子:"杯状细胞反应元件"(GCRE)和"ITF增强反应元件"(IERE)进行分析,观察在GLN的刺激下,是否有特异的核蛋白与之结合,并对获取的核蛋白进行初步分析。该研究对阐明GLN调控蛋白质基因表达的分子机制以及寻找特异的GLN反应元件都具有重要的理论意。
