2004年以来，高致病性禽流感病毒（HPAIV）在世界范围内引发大流行，致命性人类感染病例也时有报道。本课题通过对HPAIV RNA聚合酶（RdRp）结构与功能关系的研究，探讨RdRp对HPAIV跨越种间屏障感染哺乳动物的毒力的作用。1.利用复制子系统，比较HPAIV强毒株和弱毒株RdRp活性的差异。2.体外重建RdRp，利用体外转录系统比较并确定影响感染人类毒力的重要结构域。3。确定与HPAIV

流感病毒RNA聚合酶由PB2，PB1和PA组成的异三聚体。流感病毒RNA聚合酶可以催化转录和复制。我们从昆虫细胞表达，并通过镍柱纯化RNA聚合酶。然后，分析了它的生化特性。在体外，RNA聚合酶能够催化流感病毒所有生化反应：以ApG 和globin mRNA为引物和无引物的RNA转录以及RNA多聚A化。 应用这个系统，我们分析了流感病毒转录、复制起始机制；几个PB2重要突变体的功能；H1N1与H5N1RNA聚合酶亚单位重组体生化以及分子生物学特性；不同启动子功能分析。我们建议无论是vRNA还是cRNA，它们从头合成都是从内部起始的。A型流感病毒基因组5ˊ-端含有13个保守核苷酸序列，3ˊ-端含有12个保守序列。在自然情况下，3ˊ-端第四位核苷酸存在变异，可以是U或C。我们发现，无论是在体外系统还是在病毒产生过程中，U4启动子要比C4启动子强。A型流感病毒基因重组可以导致病毒的全球大流行。猪流感病毒引起2009年全球大流行。该病毒的PB2，PA基因是禽来源的；此外PB2第627位氨基酸是谷氨酸。我们发现H5N1高致病性禽流感病毒的PB1，PA基因能够增强H1N1流感病毒RNA聚合酶