中文摘要
本项目开展了 BLM 和大肠杆菌RecQ 解旋酶的表达、分离、纯化及鉴定，BLM 与大肠杆菌RecQ 解旋酶不同区域的功能及其相互之间的协调机理，Hg2+对BLM 解旋酶结构和功能的影响，BLM解旋酶的DNA 解链动力学机制及分子基础，RecQ 解旋酶的结构和功能的关系等研究。获得的两种高纯度的解旋酶，并具有DNA 结合活性、ATP 依赖性的DNA 解旋酶活性及DNA 依赖性的ATP 酶活性；研究了盐和PH对两种解旋酶结合到DNA上的影响；证明了Hg2+对BLM 解旋酶的酶活性具有抑制作用，对BLM 解旋酶的构象具有影响，并与解旋酶可能存在两类结合位点；BLM 解旋酶在解开双链DNA 时以单体形式存在；大肠杆菌RecQ 解旋酶在水溶液中以单体形式存在；RecQ 解旋酶有一个DNA 结合位点并具有盐依赖性。另外，建立了蛋白质结构和功能研究平台，并与中国科学院物理研究所、法国国家科学研究中心开展了合作关系。撰写论文4 篇，其中已发表1 篇，录用1 篇，有2 篇已投寄相关学报，正在审稿中。培养博士生1 名，硕士生2 名。
英文摘要
We have performed the some researches as follows: the expression, separation, purification and identification of BLM and E.coli RecQ helicase, the function of different regions in BLM helicase and E.coli RecQ helicase, and the mechanism of coordination in the regions, the mercuric effects on the structure and function, kinetic mechanism of DNA unwinding and molecular basis of the BLM helicase core, the relationship between the structure and function of RecQ helicase. We obtain two helicases of high-purity that have DNA-binding activity, and that are ATP-dependent helicase and DNA stimulated ATPase. We have investigated the effect of salt and pH on RecQ binding to DNA.The enzymatic activity of the BLM helicase is inhibited by mercuric ion. The conformation of BLM helicase is affected by the mercuric that probably has two binding sites with the helicase. The helicase core of BLM unwinds duplex DNA as monomers. E. coli RecQ helicase is monomeric in solution. The RecQ helicase has a single strong DNA binding site that is salt-dependent. In addition, we have established the working platform of study on the structure and function of protein, and developed the cooperation with Institute of Physics in Chinese Academy of Sciences and National Center for Scientific Research in France under great support from this project
结题摘要
本项目开展了 BLM 和大肠杆菌RecQ 解旋酶的表达、分离、纯化及鉴定，BLM 与大肠杆菌RecQ 解旋酶不同区域的功能及其相互之间的协调机理，Hg2+对BLM 解旋酶结构和功能的影响，BLM解旋酶的DNA 解链动力学机制及分子基础，RecQ 解旋酶的结构和功能的关系等研究。获得的两种高纯度的解旋酶，并具有DNA 结合活性、ATP 依赖性的DNA 解旋酶活性及DNA 依赖性的ATP 酶活性；研究了盐和PH对两种解旋酶结合到DNA上的影响；证明了Hg2+对BLM 解旋酶的酶活性具有抑制作用，对BLM 解旋酶的构象具有影响，并与解旋酶可能存在两类结合位点；BLM 解旋酶在解开双链DNA 时以单体形式存在；大肠杆菌RecQ 解旋酶在水溶液中以单体形式存在；RecQ 解旋酶有一个DNA 结合位点并具有盐依赖性。另外，建立了蛋白质结构和功能研究平台，并与中国科学院物理研究所、法国国家科学研究中心开展了合作关系。撰写论文4 篇，其中已发表1 篇，录用1 篇，有2 篇已投寄相关学报，正在审稿中。培养博士生1 名，硕士生2 名。