MTB如何逃避宿主免疫反应得以存活，分子机制尚未完全明确。NLRC3是具有抑炎作用的NLRs家族成员，可负调多种固有免疫信号通路，在抗结核免疫中的功能尚无报道。课题组前期研究发现，NLRC3在MTB感染的巨噬细胞中可促进MTB存活和增殖，负调STING信号通路下游IFN-β和CXCL10的表达、及自噬发生。在此基础上，拟：①检测MTB感染的巨噬细胞中MTB增殖规律与NRLC3表达规律的相关性；②检测NLRC3对巨噬细胞MTB杀伤的影响；③检测MTB感染的巨噬细胞中NLRC3对STING信号通路的抑制效应；④研究MTB感染的巨噬细胞中NLRC3负调STING信号通路的机制；⑤利用NLRC3基因敲除小鼠，体内实验验证NLRC3在MTB免疫逃逸中的效应。通过本项目研究，将明确NLRC3在MTB逃逸机体免疫反应中的作用，有助于解析MTB免疫逃逸机制，为以NLRC3为靶点的抗结核免疫治疗提供依据。

The mechanism, how Mycobacterium tuberculosis (MTB) escapes the host immune system to survive, is not yet clear. NLRC3, a negative regulator of inflammatory signalling, can suppress various innate immune signaling pathways, but the function remains unclear in tuberculosis. Our preliminary experimental results shown NLRC3 promoted the MTB survival ability, and impeded downstream type I interferon production and autophagy in MTB infection. Thus we seek to explore the possible involvement of NLRC3 in immune escape of MTB. For this purpose, we intend to: i) analyze the expression of NLRC3 and proliferation of MTB in MTB-infected macrophage; ii) confirm NLRC3 suppresses anti-MTB immunity in macrophage; iii) determine whether NLRC3 negative tunes the STING signal pathway in MTB infection; iv) explore the mechanism NLRC3 negative tunes the STING signal pathway in MTB infection; v) erify the above effects and mechanisms in MTB-infected animals using NLRC3 deficiency mice. This study will elucidate the effects and mechanisms of NLRC3 in tuberculosis immunity, help to reveal the molecular mechanism how the MTB evades host immune response and establish the basis for development of novel immunotherapy for TB by targeting NLRC3.

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB）如何逃避宿主免疫反应得以存活，分子机制尚未完全明确。研究表明，通过NLRs家族抑炎性成员负调宿主固有免疫反应，是病原菌免疫逃逸的重要策略。NLRC3是具有抑炎作用的NLRs家族成员，可负调多种固有免疫信号通路，但在抗MTB免疫中的功能尚无报道。本项目主要探讨了MTB是否可以通过NLRC3抑制宿主固有免疫反应，进而免疫逃逸。① 检测MTB感染巨噬细胞中MTB增殖规律和NLRC3表达规律的相关性，发现MTB在宿主巨噬细胞中的增殖规律和NLRC3的表达规律相对一致；② 利用NLRC3稳定过表达和shRNA沉默表达的THP-1诱导的巨噬细胞，培养Nlrc3-/-小鼠BMDM，探究NLRC3对MTB存活能力的影响，发现NLRC3过表达后，MTB在巨噬细胞中增殖速度显著升高，而NLRC3基因沉默或者缺失后，MTB在巨噬细胞中增殖速度显著降低；③ 检测NLRC3在巨噬细胞中如何调节固有免疫反应，结果显示NLRC3基因缺失后，STING下游TBK1和IRF3磷酸化水平显著上调，细胞因子IFN-β和CXCL10表达上调，自噬水平上调，而NLRC3过表达巨噬细胞中，结果相反，说明NLRC3抑制了STING信号通路的激活；④ 检测NLRC3和STING的共定位情况，分析NLRC3是否通过与STIGN直接结合抑制STING信号通路，免疫荧光与免疫共沉淀结果显示，NLRC3可以与STING-TBK1复合物结合；⑤ Nlrc3-/-小鼠体内实验验证NLRC3在MTB免疫逃逸中的效应， 结果显示NLRC3基因缺失后，小鼠抗MTB感染能力显著增强，巨噬细胞往M1分化，胞内ROS表达升高，细胞因子IFN-β和CXCL10表达升高。该项目明确了MTB在巨噬细胞中可以通过NLRC3抑制机体STING信号通路，逃逸机体免疫反应，有助于解析MTB 逃逸机制，为以NLRC3 为靶点的抗结核免疫治疗提供依据。