由于缺少有效的治疗手段，乙型肝炎病毒（HBV）所导致的慢性感染仍旧严重威胁人类健康。持续性病毒感染的重要原因之一源于血循环中大量游离的HBsAg所诱导的免疫耐受。我们采用AAV-HBV1.3病毒构建稳定的HBV复制小鼠模型，很好地模拟了慢性乙型肝炎免疫耐受期的临床表症，证明preS1血清含量远低于HBsAg。通过这个耐受模型，我们发现单纯preS1疫苗联合适当佐剂，在HBV carrier小鼠中能诱导较强的特异性T细胞应答和清除病毒、阻断HBV感染肝细胞的preS1抗体应答。最重要的是preS1疫苗诱导的免疫反应能够部分恢复HBsAg的免疫反应。我们将以现有HBV耐受模型、HBV转基因小鼠和感染HBV的人源化小鼠1）研究单纯preS1疫苗帮助恢复慢性乙型肝炎小鼠对HBsAg免疫应答的机制；2）构建一种新型程序化的以preS1疫苗为先导，HBsAg作为加强疫苗，治疗慢性HBV感染的新策略。

Tolerance to HBV antigens limits the therapeutic effect of vaccination in both preclinical animal models and patients with chronic hepatitis B virus infection (CHB). Similar to clinical CHB, preS1 antigen level is much lower than HBV surface antigen (HBsAg) level in CHB mouse model. Unlike HBsAg, inducing tolerance in CHB who are resistant to therapeutic vaccines, administration of preS1 antigen induced a strong immune response that cleared preS1 in carrier mice. The anti-preS1 antibody induced by preS1-vaccination in carrier mice could clear serum HBV virons in vivo and block HBV infection in vitro. Also, preS1 vaccination could induce specific CD4+ T cell responses both in peripheral and in liver. Intriguingly, preS1 vaccination further reduced serum level of HBsAg. In this study, using the HBV tolerant mouse models, we will further confirm the function of anti-preS1 in neutralizing ang blocking infection of HBV, investigate the mechanisms for preS1 vaccine mediated partial restoration of immune response to HBsAg in carrier mice, optimize preS1 vaccine for replacing HBV L-antigen as a priming vaccine, and explore if a sequential combination of preS1 prior to HBsAg vaccination can become a potent therapeutic strategy for control of CHB. Our study will open up a new perspective for treatment of chronic HBV infecion.

由于缺少有效的治疗手段，乙型肝炎病毒（HBV）所导致的慢性感染仍旧严重威胁人类健康。目前被广泛使用的HBV预防性疫苗以HBsAg为抗原，不能在免疫耐受的慢性乙型肝炎病人体内诱导免疫应答。为实现慢性乙型肝炎的免疫治疗，清除病毒感染，人们做了多方面的努力，比如含有LHBsAg作为疫苗的第三代HBV预防性疫苗。鉴于第三代乙肝疫苗潜在打破免疫耐受和规模生产的局限性，我们首先提出单纯使用HBV preS1蛋白作为疫苗进行治疗的策略。首先，我们采用AAV-HBV1.3病毒构建稳定的HBV复制小鼠模型，很好地模拟慢性乙型肝炎免疫耐受期的临床表症。其次，我们发现以单纯的preS1作为疫苗联合合适的佐剂，乙型肝炎病毒的包膜蛋白存在着不同的耐受方式。在慢性乙型肝炎中，包膜蛋白HBsAg是一个主要的耐受原，血清中大量游离的由HBsAg组成的假病毒颗粒被认为是诱导耐受的重要原因。但是不同于乙肝病毒的包膜蛋白HBsAg，包膜蛋白preS1更偏向于存在在完整HBV病毒表面，因而具有更低的血清水平。我们以单纯的preS1作为疫苗，在联合合适的佐剂的情况下，能够在慢性乙型肝炎的感染模型中诱导强烈的特异性preS1抗体应答和特异性T细胞应答。体内DNA检测表明preS1诱导的特异性抗体反应能够有效地清除感染模型体内的乙肝病毒；体外实验同时表明，preS1抗体能够阻断乙肝病毒再次对肝细胞的感染。最令我们意外的是：尽管含有preS1成分的第三代疫苗和传统HBsAg疫苗，都不能改变carrier小鼠的耐受状态，单纯preS1疫苗诱导的免疫反应能够部分恢复HBV carrier小鼠体内针对HBsAg的应答, 序贯免疫preS1疫苗和HBsAg诱导HBV特异性免疫应答，清除表面抗原和HBV。我们研究成果对慢性乙型肝炎的治疗具有开拓性的意义，研究成果发表于Hepatology (2017)。