预测动脉粥样硬化易损斑块血栓形成仍是临床面临的难题。我们的前期基础实验发现，小鼠颈动脉易损斑块形成血栓的血管节段平滑肌细胞（VSMC）异常增生伴凋亡，血栓形成前血小板激活相关miR-223在血浆外泌小体中表达上调，提示血小板激活释放的外泌小体可能作为预测易损斑块形成血栓的生物标志物。然而，血小板激活释放外泌小体的miRNAs特征仍需进一步研究，体外血小板外泌小体对VSMC的作用是否和易损斑块特性一致仍需研究。本课题拟研究凝血酶诱导的血小板外泌小体miR-223表达变化，及VSMC摄取外泌小体后预测通路靶基因在mRNA和蛋白水平的变化，为进一步研究血小板外泌小体microRNA作为易损斑块血栓形成的标志物提供基础。

To predict plaque rupture is still a major, ongoing chanllenge in clinical practice. In our previous study of a vulnerable plaque thrombosis mouse model, we observed vascular smooth muscle cells (VSMCs) proliferating severely accompanied with apoptosis. Our preliminary data has shown that platelets activation was associated with miR-223 elevating in plasma exosomes before thrombosis formation. We hypothesis that thrombin induced platelets exosomes could be a biomarker for prediction of vulnerable plaque thrombosis. In the present study, we will first determine the miRNAs level of miR-223 in thrombin activated platelets exosomes and in vitro phenomenon of VSMC taking exosomes. Using gene pathway enrichment analysis to predict miR-223 target, study the mRNA and protein level in VSMC. Our result may reveal a role for platelet exosome in vulnerable plaque thrombosis.

背景：冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）是威胁我国人民生命健康的重要疾病之一， 急性冠状动脉综合征（ACS）是冠心病的最严重并发症，致残率和致死率高。虽然早期诊断和再灌注治疗对ACS患者的预后带来很大改善，但是对于这种急性发病的疾病，临床仍然缺乏有效预测ACS的生物标志。血小板在ACS中发挥重要作用，高反应性的血小板和ACS发生相关，但是体外血小板功能实验并不能完全反映体内血小板功能，因此准确反映体内血小板激活状态的标志物可能是预测ACS的重要方向。虽然已经有文献报道microRNAs（miRNA）和血小板功能的研究，但是血浆外泌小体中miRNAs作为体内血小板活性和预测急性心血管事件标志物的价值尚无研究。研究内容：（1）通过对高脂饲料喂养的ApoE敲除（ApoE-/-）小鼠进行颈动脉双狭窄手术（tandem stenosis，TS），建立动脉粥样硬化血栓模型；（2）研究血栓形成 之前血小板激活相关miR -223、miR -339和miR -21 在血浆外泌小体中的变化；（3）以及这些miRNAs在血栓模型浆外泌小体中和体外凝血酶激活的血小板源性外泌体表达水平的一致性；（4）凝血酶激活的血小板源外泌体在动脉粥样硬化栓形成中作用，其对斑块管平滑肌细胞（SMCs）的调控机制。结果：血浆外泌小体中 miR-223、miR-339 和 miR-21 水平升高与预测血栓形 成相关，其来源可能为血小板激活释放增多。血小板源外泌小体抑制 SMCs 增殖、 促进凋亡，可能通过转运 miR-223 抑制 PDGFRβ表达相关。模型血栓节段 PDGFR β水平表达下调，进一步验证血小板外泌小体在体内动脉粥样硬化血栓形成中的作 用。本课题可能为血小板和 SMCs 之间信号传导提供新途径，血小板源外泌小体可 能是预测动脉粥样硬化血栓形成的潜在生物标志物。