预实验研究证实，维生素D缺乏加重酒精性脂肪肝。本课题假设：肠黏膜完整性受损和肠源性LPS的渗漏在这一过程起关键作用。为验证该假设，本课题拟采用含乙醇但不含维生素D的液体饲料喂养小鼠以构建维生素D缺乏合并酒精性脂肪肝动物模型。比较不同处理组小鼠肠黏膜完整性受损程度和肠源性LPS渗漏水平，阐明维生素D在维持肠黏膜完整性中的作用。分析维生素D缺乏状态下小鼠肠上皮细胞β-连环蛋白在小鼠肠上皮细胞胞膜、胞浆和胞核的分布；用siRNA技术抑制Caco-2细胞VDR表达，观察VDR基因沉默状态下维生素D能否改变β-连环蛋白与LEF/TCF的相互结合以及β-连环蛋白在Caco-2细胞胞膜、胞浆和胞核的分布，阐明维生素D维持肠黏膜完整性的分子机理。本课题为阐明维生素D缺乏加重酒精性脂肪肝的机理提供理论依据。

Preliminary studies confirmed that vitamin D deficiency aggravated alcoholic fatty liver. We speculated that intestinal mucosal integrity damaged and enterogenous LPS leakage plays a key role in this process. In order to verity the hypothesis, alcoholic fatty liver with vitamin D deficiency animal model will be established by fedding ethanol-containing liquid diet without vitamin D. The role of vitamin D in maintaining the integrity of the intestinal mucosa will be clarified by comparing the extent of the damage in intestinal mucosal and levels of leakage for intestinal LPS from different groups of mice. The distribution of β-catenin in mouse intestinal epithelial cell membrane, cytoplasm and nucleus will be analyzed under the analysis of the state of vitamin D deficiency.The effect of vitamin D on the distribution of β-catenin and the binding of β-catenin with LEF/TCF was observed under a state of VDR gene silencing in Caco-2 cells, which in turn reveal the molecular mechanism of vitamin D maintaining the integrity of the intestinal mucosa. The theoretical basis will be provided for the mechanism of vitamin D deficiency aggravated alcoholic fatty liver.

本项目为确定维生素D 水平与酒精性脂肪肝发生的相关性及可能机制做了以下研究：其一，通过维生素D缺乏饲料喂养5周龄ICR雄鼠小鼠12周后，以4 g/kg小鼠体重为标准，一次性灌胃50%(V/V)乙醇溶液，建立维生素D缺乏合并急性酒精性肝损伤模型。于给药12 h后，对小鼠进行剖杀，收集血清和肝脏。结果发现，维生素D缺乏显著降低了急性酒精引起的血清ALT水平的上升，且减轻急性酒精诱发的肝脏TG含量和脂质沉积；同时，显著下调了急性酒精诱导的fas和acc的mRNA水平的升高，抑制了急性酒精诱导的肝脏SREBP-1c的激活；维生素D缺乏减轻了急性酒精诱导的肝脏CPT1α、CYP4A10和CYP4A14基因表达的下调，并抑制了急性酒精引起的肝脏PPARα蛋白水平的下调。其二，通过缺乏维生素D 的乙醇Lieber-DeCarli液体饲料喂养5周龄C57BL/6J雄性小鼠6周，建立维生素D缺乏合并慢性酒精性脂肪肝模型。结果发现，与单纯酒精组相比，维生素D缺乏合并酒精组小鼠肝脏系数、血清ALT和AST水平均增加，且脂肪变性程度加重；维生素D缺乏增加了慢性酒精诱导的小鼠MDA水平，且明显降低了肝脏GSH-Px、SOD1和catalase的mRNA水平；同时，维生素D缺乏上调了慢性酒精诱导的小鼠肝脏TNFα和IL1β以及TGFβ的mRNA水平以及趋化因子MCP1和KC的mRNA水平。其三，通过乙醇Lieber-DeCarli液体饲料喂养5周龄C57BL/6J雄性小鼠6周，且每3天给予一次25μg/kg的VitD3灌胃处理，建立维生素D补充合并慢性酒精性脂肪肝模型。结果发现，维生素D补充可降低慢性酒精导致的细胞增殖与凋亡水平，且改善其病变程度；同时，逆转了小鼠肝脏CD36、FABP4以及LPL的mRNA水平的升高；维生素D补充降低了慢性酒精诱导的肝脏iNOS mRNA水平以及CYP2E1和HO-1蛋白表达水平的升高，且显著下调慢性酒精诱导的肝脏TNFα和MCP1的mRNA水平的升高。其四，人群研究发现维生素D水平与酒精性脂肪肝发生呈负相关，其数据在整理中。以上结果表明，维生素D缺乏可以通过减少脂肪酸从头合成和促进脂肪酸β氧化及ω氧化途径来减轻急性酒精诱导的肝脏脂质沉积；维生素D缺乏可通过炎症反应加重慢性酒精诱发的脂肪肝发病；维生素D补充可改善慢性酒精性脂肪肝的发病，其机制可能与炎症发生相关