迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）是当前水产养殖业中的重要致病菌，对其实用性疫苗的开发具有重要意义，但采用常规技术制备的E. tarda灭活疫苗对鱼体不能产生有效的免疫保护。本项目拟以本实验室前期发明的几种可有效维持E. tarda抗原免疫保护力的灭活方法制备的灭活疫苗为基础，以牙鲆（Paralichthys olivaceus）为实验动物，通过灭活E. tarda的抗原特征、免疫保护性及其对鱼体的体液和细胞免疫激发效应的差异比较，分析灭活条件对E. tarda灭活疫苗得以保持或丢失其免疫保护性的原因，阐释可产生免疫保护性的E. tarda灭活疫苗的作用机制，为E. tarda灭活疫苗的研发提供基础依据。

Edwardsiella tarda has become one of the most important emerging pathogens in the current aquaculture, therefore, the design of an effective vaccine to prevent this pathogen is very important. But we find that the inactivated vaccine by the route methods can not produce the immune protection for fish. Based on our pre-invention which can effectively maintain E.tard antigen immune protection in the inactivated vaccine preparation, the new inactivated E.tarda vaccine prepared under different inactivation conditions were investigated using Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) as a model. Comparing the results of the antigenic characteristics, the differences in immunogenicity, and its impact of humoral and cellular immune responses of the inactivated vaccine were evaluated. Based on the obtained results we try to explain the reasion to maintain and lose protective immunity for this vaccine. This work will help us to understand the immune protection mechanisms induced by inactivated E.tarda vaccine. This studies also provide a scientific basis for the developed an effective E.tarda inactivated vaccine in future.

迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是当前水产养殖业中的重要致病菌，对其实用性疫苗的开发具有重要意义，但采用常规技术制备的E. tarda灭活疫苗对鱼体不能产生有效的免疫保护。本项目评估了3种可有效维持E. tarda抗原免疫保护力的灭活方法，确定盐酸、福尔马林和β-巯基乙醇采用低灭活强度制备的E. tarda灭活疫苗，对斑马鱼具有较好的免疫效果，可提高鱼体的抗体效价水平，人工感染后较对照组，可分别产生62.8%、60.6%和50.7%的相对保护率。根据不同灭活剂浓度F(%)、灭活温度T(°C)和灭活时间T(h)对灭活效果的影响，建立福尔马林作为灭活剂对爱德华氏菌的精确灭活模型。即pS=k×(F+F0)a×(T+T0)b×(A+A0)c来模拟，其中pS为爱德华氏菌的存活率负对数，F0、T0和A0分别为F、T和A的初始参数，a、b和c分别为F、T和A的权重指数。该精确模型确定了既实现爱德华氏菌有效灭活，又维持其抗原免疫保护力的精确参数。上述研究对E. tarda灭活疫苗的基础及应用研究具有重要意义，为研究灭活E. tarda细胞保持或丢失其免疫保护性的原因，揭示这类对灭活条件高度敏感的病原的灭活疫苗能形成免疫保护的机理具有重要意义，也为爱德华氏菌灭活疫苗产业化开发提供了技术可能。佐剂研究领域，确定了黄芪皂苷可有效提高灭活的E. tarda灭活的免疫效果，以斑马鱼和大菱鲆为模式动物的免疫实验中，腹腔注射接种添加5mg/mL的黄芪皂苷的E. tarda灭活疫苗组，受试鱼可分别获得73.8%和60.6%的相对保护率(P<0.05)，该佐剂也可显著诱导斑马鱼免疫因子的相对表达，斑马鱼的TNFα和IL-1β基因的转录水平在感染后6h均达到最高值，较对照组分别约提高了32倍和9倍，两基因均在感染后24h表达量有所下降，但仍然明显高于对照组。这一结果也为E. tarda的疫苗控制技术的基础及实用化开发提供了参考及理论依据。