肺纤维化IPF是一种原因不明的且具有高死亡率的难治性肺部疾病。有关研究发现1-磷酸鞘氨醇S1P/鞘氨醇经鞘氨激酶SPHK信号通路通过多途径影响肺部相关性疾病的发生发展。本课题旨在通过观察S1P/SPHK信号通路在IPF形成中的作用，以及银杏叶提取物对于S1P/SPHK信号通路的影响，为IPF提供新的治疗靶点。实验方案一：在体动物实验研究，（一）观察博莱霉素致肺纤维化小鼠的血清及肺组织中S1P /SPHK水平，以及肺组织中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白的表达水平。（二）观察银杏叶提取物对博莱霉素致肺纤维化小鼠肺纤维化的干预作用。实验方案二体外细胞研究（一）经S1P处理/SPL的siRNA转染人胚肺成纤维细胞，检测HELF细胞增殖凋亡及TGF-β的蛋白和mRNA表达。（二） 腺病毒介导的SPHK1基因（Ad-SPHK）转染HELF，观察其增殖、凋亡及α-SMA表达。

Pulmonary interstitial fibrosis is a type of refractory lung disease with unknown cause and high mortality. Related research found that S1P/SPHK signaling pathway affect the occurrence and development of related clung diseases through multi-channel . This topic aims to observe S1P/SPHK signaling pathways in the role of IPF formation, and the influence of ginkgo biloba extract on S1P/SPHK signaling pathways,find new therapeutic targets for IPF. Experiment scheme A: vivo animal studies, (1) To observe pulmonary interstitial fibrosis mice modelled by bleomycinis the levels of S1P/SPHK in serum and lung tissue, and the levels of α-SMA, Ⅰ collagen in lung tissue. (2) To observe the i influence of ginkgo biloba extract on pulmonary interstitial fibrosis mice modelled by bleomycinis. Experiment scheme B vitro cell research (a)After the S1P processing/SPL siRNA transfection embryonic lung fibroblasts, testing the proliferation, apoptosis and TGF - protein and mRNA expression of beta of HELF cells . (2) Adenovirus mediated SPHK1 transfection HELF, observe the proliferation, apoptosis, and alpha SMA expression of HELF cells .

特发性肺纤维化是（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一种慢性、进行性、纤维化性间质型肺病，其病理组织学改变与普通的间质型肺炎相似，但发病率逐年升高，可发病原因尚未完全阐明。无论是肺纤维化动物肺组织中，还是IPF病人的血清和肺泡灌洗液中S1P及其激活必须的鞘氨醇激酶1（Sphk1）水平均升高，并且SphK1抑制剂可以缓解动物肺纤维化。因此，研究S1P/SphK1分子通路，可能为治疗IPF提供新的思路。银杏叶是我国传统中药，具有敛肺平喘、活血化瘀、消炎止痛等作用。已有研究报道银杏叶提取物能够抑制动物肝纤维化、肾纤维化及肺纤维化。然而，银杏叶提取物治疗肺纤维化的机制尚未明确。本篇研究中，我们将研究银杏叶提取物中的一种黄酮成分—槲皮素，能够缓解博来霉素诱导的小鼠特发性肺纤维化，并探索其分子机制。利用博来霉素诱导小鼠IPF模型，同时利用TGF-β建立IPF细胞模型，针对对在体动物模型和离体细胞模型，给予槲皮素处理后，使用病理学技术（HE染色、Masson染色）和分子生物学（Western-blot、Real-time PCR、ELISA）手段研究槲皮素治疗IPF的作用机制，利用构建SphK1表达载体，影响细胞内SphK1表达水平，进一步研究槲皮素对IPF在发挥抗纤维化作用时，是否通过调节S1P/SphK1信号通路。本项目研究结果显示，槲皮素对IPF处理后，无论是对博来霉素诱导小鼠IPF模型，还是TGF-β建立IPF细胞模型，均显示出抗纤维化的作用，染色结果可以看出槲皮素明显的抗纤维化作用，同时纤维化相关指标和S1P/SphK1通路相关指标的表达水平均显著下降，且具有一定的剂量依赖性；利用构建SphK1表达载体，提高细胞内SphK1表达水平后，纤维化相关指标的表达水平也随之升高。总而言之，银杏提取物-槲皮素可抑制IPF小鼠/细胞模型中S1P/SphK1信号通路，从而降低纤维化相关指标的表达水平，起到抗纤维化的作用。本项目的研究结果可为临床IPF的治疗提供新的思路，为探索IPF的发病原因提供理论依据。