血栓性疾病严重危害人类健康，其发病机制与治疗是医学研究的重点。中性粒细胞胞外陷阱（NETs）已成为血栓形成研究的新风向标。本课题组前期研究发现anti-β2GPⅠ阳性脑血栓患者的中性粒细胞更易产生NETs，进一步研究发现anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ可刺激中性粒细胞释放ROS产生NETs并网罗血小板，迄今国内外对此尚无报道。因此本课题拟用anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ作为诱导剂，通过体外及体内实验，利用化学阻断、流式细胞术、免疫荧光、免疫印迹等技术，全方位研究anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ刺激中性粒细胞产生NETs促进血栓形成中ROS及MAPK信号转导通路所起到的作用，从而进一步完善anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ引起中性粒细胞NETs释放及血栓形成的机制，为自身抗体相关的血栓性疾病的预防和治疗提供新思路。

The focus of medical research is to explore the pathrogenesis and therapy of thrombotic diseases, which is serious damage to human health. Neutrophil extracellular traps (NETs) has been a new indicator of thrombosis. Our previous studies indicated that neutrophils release more NETs in thrombotic patients with anti-β2GPⅠ antibodies. Futher, we found that anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ complex increased ROS release and promote NETs to catch platelet, these results is not reported either at home or abroad. Therefore, chemicals blocking, flow cytometry, immunofluorescence and western blot technology were used to investigate the role of ROS and MAPK signaling pathway in NETs release from neutrophils and promote thrombosis stimulated by anti-β2GPⅠ/β2GP, which was as the revulsants, in vitro and in vivo. Futhermore, this study wants to provide novel therapeutic strategies to prevent and treat autoantibody associated thrombotic diseases through improve the possible mechanism of anti-β2GPⅠ/β2GP-induced NETs release from neutrophils and thrombosis.

抗β2GPⅠ抗体与血液高凝状态和血栓形成密切相关，研究表明anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物参与了多种自身免疫性疾病相关的血栓形成。中性粒细胞胞外捕网（NETs）由中性粒细胞颗粒蛋白和染色质构成，具有杀灭胞外病原微生物的作用，是新发现的与血栓形成有关的结构。本项目旨在探讨anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导中性粒细胞释放NETs的机制及其在血栓形成中的作用。 通过体外实验，探讨anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导健康人中性粒细胞产生活性氧（ROS）、活化丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)，在NETs释放及其对组织因子网罗中的作用。通过体内实验，研究anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物刺激大鼠中性粒细胞产生ROS、活化MAPKs，对NETs释放和血栓形成的影响。 体外实验显示，anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物可促使中性粒细胞ROS产生、p38MAPK/ERK磷酸化和NETs释放，且刺激产生的NETs对TF具有网罗作用。加入ROS抑制剂（DPI）、p38MAPK抑制剂（SB203580）或ERK1/2抑制剂（U0126）后，中性粒细胞NETs释放减少，MAPKs抑制剂可使ROS的产生显著减少。体内实验显示，anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物注射后大鼠血管闭塞时间缩短；中性粒细胞ROS产生、p38MAPK/ERK磷酸化、NETs释放及TF mRNA表达水平均显著升高。注射DPI、SB203580或U0126后，大鼠血管闭塞时间明显延长；中性粒细胞ROS产生、p38MAPK/ERK的磷酸化、NETs释放及TF mRNA表达水平均显著降低。 本研究证实了Anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物可促使健康人中性粒细胞产生NETs、网罗TF并促进大鼠血栓形成，并进一步明确anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导中性粒细胞产生NETs依赖于ROS的产生和MAPKs磷酸化，且MAPKs为anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导中性粒细胞产生ROS的上游信号转导通路。