中药胶剂由于加工过程时间长、步骤繁琐、加入各种辅料（如糖、油、盐等），制作过程中的工艺指标多不量化，因而成分复杂、产品为随机结构的水解物，质量评价从成分上难以入手。笔者研究胶剂时发现阿胶胰蛋白酶水解液的电泳谱出现多条细条带。若采用不同酶对动物胶进行水解，由于不同蛋白酶的酶切位点不同，条带位置具有一定差异。基于上述实验发现，本项目以阿胶为基础，考察各种酶的酶解条件、分别采用酶解物-小分子蛋白电泳(Tricine-SDS-PAGE)二维谱法、酶解物-HPLC法、酶解物-HPSEC法对胶剂进行质量评价，同时进行多批次的研究，以取得其指纹特征性：通过考察不同批次正品阿胶特征谱的重现性、其他皮胶与阿胶之间差异的特征性及该方法的重现性。从中总结出该方法的规律。

Since Traditional Chinese medicine adhesive agent has a long production process and complicated steps, joins a variety of accessories(such as sugar,oil,salt,etc)，and usually doesn’t have the technology index quantification in production process, therefore the composition is complex, structure of hydrolysate is random, quality evaluation is difficult from the ingredient. When studied on the adhesive agent, the author found electrophoresis of E'jiao(donkey-hide gelatin)Trypsin Hydrolysis liquid appeared a number of thin belt. If we use different enzyme to hydrolyse it, because of different cutting site in different protease enzyme , strip position is different. Therefore, based on the above experiments, we‘ll inspect several kinds of enzyme hydrolysis conditions, use 3 methods respectively for quality evaluation of adhesive agent:Two-dimensional spectrum of Enzymatic hydrolysate - Small molecule protein electrophoresis (Tricine-SDS-PAGE) , hydrolysates-HPLC method and hydrolysates-HPSEC method. Meanwhile, multiple batches of products will be studied and the characteristic fingerprints will be summarized. Then study the reproducibility of the characteristics spectrum among different batches of authentic E'jiao, the characteristic between E'jiao and other adhesive agents. Finally, summarize the regularity of this method.

1项目背景中药胶剂质量评价从成分上难以入手。前期实验发现：胶剂PAGE鉴定时，其各种酶解物的条带数变多。因此提出假说：采用不同蛋白酶的酶解产物作为样品进行特征谱带研究，其信息量更大；且由于酶切位点相对固定，减小了裂解的随机性。2研究内容、重要结果与关键数据2.1酶解物-SDS-PAGE法可对不同物种（阿胶、鹿角胶、龟甲胶）胶剂进行分辨，但无法分辨不同厂家相同物种胶剂。方法较繁，精细度不足，仅作为胶剂定性鉴别思路之一。2.2酶解物-HPLC法优化方法为：取5%的阿胶水炖化液，分别加入10万U/g胃、2.5万U/g胰、30万U/g木瓜、2.5万U/g糜蛋白酶，调pH后于40℃酶解4h，后95℃灭活20min，依次用脱脂棉、定量滤纸、0.45μm微孔滤膜过滤，制成4个样品。进样量20μl，流速1ml/min，检测波长280nm，C18HPLC柱，A相：0.2mol/LNa2SO4-H3PO4-H2O（pH=2.3）；B相：ACN-H2O（90：10），按0-5min（90-84B%）；5-25min（84-72B%）；25-35min（72-60B%）；35-40min（60-48B%）梯度洗脱。阿胶辅料、加入试剂及胰酶对分析无干扰；其他酶需排除干扰。精密度及重现性图谱相似度>0.9；保留时间RSD<5%，峰面积RSD<11%。样品冷冻需不超过2d。胃、木瓜酶图谱不稳定，胰酶在6.4及11.3min、糜酶在12.9、13.4、13.8、15.1、33.6min处为共有峰。聚类及PCA结果：东阿、同仁堂和福牌阿胶（精装）得分分布集中，福牌阿胶（铁盒装）分布较散，说明其原辅料来源可能较广。糜酶分布距离更大，但其指纹图谱相似度、峰面积RSD较胰酶更优。2.3酶解物-HPSEC法优化方法为：5%阿胶酶解液，流速0.5ml/min，TSKgelG2000PW色谱柱，0.05mol/L的磷酸缓冲盐（pH=6.8）+0.1mol/LNaCl等度洗脱，柱温：25℃，波长280nm。排除了蛋白酶和酸碱的干扰，重现性实验相似度极高。峰形较C18柱为差，主峰无法分开。2.4市面上的正品阿胶，其胰、糜酶酶解物的HPLC、HPSEC图谱主峰形均一致。3科学意义本项目结论支持由前期实验推出的假说。其前景确实可找到阿胶指纹图谱控制方法，并可为动物类中药鉴别打开一个新的突破口