兴奋性氨基酸毒性是脑缺血病理损伤的重要始动环节，炎症反应也是脑缺血损伤的重要病理机制之一，两者的发生发展均与星形胶质细胞密切相关。近年研究发现，干预星形胶质细胞的功能变化对治疗缺血性中风具有重大意义。脉络宁注射液是基于疏风通络、活血化瘀理论的中药复方，临床应用多年，疗效确切。前期研究显示脉络宁注射液可抑制脑缺血后星形胶质细胞过度激活，并上调星形胶质细胞中GLT-1表达。基于此，本项目提出“脉络宁注射液对脑缺血损伤的保护机制可能是通过调节GLT-1的表达，影响星形胶质细胞的功能，重塑NVU而发挥作用”这一假说。本项目拟通过体内外实验，从整体、组织和细胞水平，采用局灶性脑缺血动物模型、OGD细胞损伤模型、免疫组化、流式细胞仪、Real-time PCR、Western blot等技术，揭示脉络宁注射液调控星形胶质细胞GLT-1保护神经血管单元的作用机制，为中药复方防治缺血性中风奠定理论依据。

Excitatory amino acids toxicity is one of the important initiating pathological injury of cerebral ischemia, inflammatory response is also one of the important pathological mechanism, they both are closely associated with astrocytes. The recent study found that intervention in the function changes of astrocytes are of great significance to the treatment of ischemic stroke.Mailuoning injection is effective in treating cerebrovascular diseases，and is well used in clinical. Previous studies have shown that Mailuoning injection can inhibit excessive activated of astrocytes after cerebral ischemia, can raise expression of GLT-1 of astrocytes. Therefore we hypothesize that Mailuoning injection on cerebral ischemia injury protection mechanism may be associated with regulating the expression of GLT 1, affect the function of astrocytes, reshape NVU. In this project, we will make focal cerebral ischemia in the rat MCAO model and sugar-oxygen deprivation cells model, use immunohistochemistry, Flow cytometry instrument, Real-time PCR, Western blot, to detected the neural protective mechanism of Mailuoning injection contributing to prevention and treatment of ischemic stroke based on traditional Chinese medicine.

缺血性中风是发病率较高的脑血管疾病，严重威胁人类生命安全。脉络宁注射液是基于疏风通络、活血化瘀理论的中药复方，临床应用多年，疗效确切，但其作用机制仍不明确。兴奋性氨基酸毒性是脑缺血病理损伤的重要始动环节，炎症反应也是脑缺血损伤的重要病理机制之一，两者的发生发展均与星形胶质细胞密切相关。尤其前者是钙超载、线粒体损伤、氧化应激等级联损伤的的重要始动环节，并与星形胶质细胞膜上GLT-1表达变化存在密切联系。本项目采用大脑中动脉栓塞（MCAO）法和氧糖剥夺法（OGD）制备SD大鼠局灶性脑缺血动物模型和体外神经血管单元细胞损伤模型，采用免疫组化、流式细胞仪、Western blot等技术从整体、组织和细胞水平检测缺血损伤后脑组织星形胶质细胞标志性蛋白原纤维酸性蛋白(GFAP)和谷氨酸转运体GLT-1的表达，探讨星形胶质细胞功能改变与脉络宁注射液药效之间的关系。研究结果显示，脉络宁注射液预保护处理具有明显的脑缺血保护作用，可改善急性脑缺血所致的大鼠神经行为功能障碍，减少脑梗死面积，改善组织病理学变化；脑缺血后缺血侧脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达明显增加，而星形胶质细胞上GLT-1的表达明显减少，说明脑缺血后伴随着星形胶质细胞的过度激活和GLT-1表达的减少，脉络宁预保护处理可减少脑缺血后缺血侧脑组织GFAP的表达，而提高GLT-1的表达。离体实验结果显示脉络宁注射液可提高OGD损伤引起的神经元-星形胶质细胞共培养体系中神经元与星形胶质细胞存活率，减少培养液中LDH含量，抑制OGD引起的细胞凋亡。OGD损伤引起模型组星形胶质细胞中GLT-1的表达减少，脉络宁可上调GLT-1的表达。上述结果提示，脉络宁的脑缺血保护作用与其抑制星形胶质细胞过度激活，上调星形胶质细胞内GLT-1表达，从而抑制炎症反应和改善兴奋性氨基酸毒性引起的级联损伤存在密切关系。