为了解决非小细胞肺癌患者难以获得组织学标本，或避免二次活检进行基因检测的问题，我们收集50例细胞学标本（包括细针吸取、浆膜腔积液等）制作液基薄层涂片及悬浮液。用荧光原位杂交和免疫细胞化学方法检测ALK基因的融合及蛋白表达。同时用免疫细胞化学方法检测PD-L1的蛋白表达。随后对基因融合率及蛋白表达率进行统计分析，阳性患者如果有临床用药，进行临床随诊观察。以此将微量的细胞学标本和精准的检测技术相结合，建立一套完整、规范的检测基因异常及蛋白表达的平台，完善非小细胞肺癌基因检测的流程，使更多的肺癌患者有的放矢地得到个体化治疗。

As to the problem of being unavailable to histopathology specimens, we collect 50 cytology specimens (including FNA，serous effusion and so on) to make Liquid-Based Cytology(Thin-Prep) and suspension. Then, fluorescence in situ hybridization and immunocytochemistry for gene fusion and protein expression of ALK, immunocytochemistry for protein expression of PD-L1 can be performed. After making statistical analysis of gene fusion rate and protein expression rate, the positive ones would be followed if they have targeted therapy. Finally，combined microscale cytology specimens with accurate technology, we could establish a complete effective platform of the cytology specimens to detect the molecular target variations of non-small-cell lung cancer, as to make targeted therapy more personally and widespreadly.

项目背景肺癌成为我国许多地区恶性肿瘤死亡的第一位。用细胞学标本进行基因的检测在国际上刚刚起步。用微量细胞学标本和精准检测技术结合检测基因异常的平台还未建立。临床上，肺癌患者的基因检测困难之处在于，取不到形态学标本，有时需要进行二次活检，但是这样对患者损伤很大。本课题欲应用细胞学标本和精准的检测技术结合，检测肺癌患者ALK的基因融合，以及PD-L1的蛋白表达。主要研究内容1.收集肺腺癌患者细胞学标本（细针吸取、浆膜腔积液标本等），包括细胞蜡块50例和液基薄层涂片标本50例。 应用免疫细胞化学的方法检测非小细胞肺癌两种标本类型中ALK(D5F3)融合蛋白的表达情况。随后阳性表达者进行FISH基因检测验证。从而探索细胞蜡块及液基薄片标本进行肺癌ALK免疫组化检测的可行性。2.收集细胞肺腺癌患者细胞学标本（细针吸取、浆膜腔积液标本等）50例，进行细胞块切片和液基薄片制片。将两种标本进行应用全自动免疫组化仪进行PD-L1检测。重要结果1.ALK蛋白在肺腺癌淋巴结转移灶FNAC标本阳性率为11.56%（17/147），细胞蜡块及液基薄片ALK阳性率分别为7.96%（9/113），13.22%（16/121）。根据此实验结果我们认为，进展期肺癌患者无法获取手术标本，细胞块可以用来进行ALK（D5F3）的蛋白检测，当标本无法制成细胞块时，细胞学液基薄层涂片可以用来进行ALK（D5F3）的蛋白检测。2.PD-L1在肺腺癌细胞蜡块阳性表达率为40%（20/50），在液基薄片标本表达率为38.00%（19/50），二者无明显统计学差异。科学意义 目前，靶向治疗及免疫治疗是继手术、放疗、化疗之后肺癌治疗的又一重大突破。尤其是对于Ⅲ-Ⅳ期肺癌，发生锁骨上淋巴结转移或有胸水的晚期肺癌患者，靶向治疗及免疫治疗可能是其唯一的治疗方式。他们无法获取手术或活检标本，但是易于获取淋巴结细针吸取标本及胸水标本，应用这些细胞学标本进行与肺癌靶向治疗及免疫治疗相关驱动基因检测，可使得晚期肺癌患者获得治疗机会。