中文摘要
隐睾是小儿时期最常见的泌尿生殖畸形,生精细胞受到损害,激素和/或睾丸固定术治疗不能有效改善患者成年后的生殖功能。睾丸器官组织移植、精原干细胞移植、胚胎干细胞研究均面临严峻的生殖伦理学考验;骨髓MSCs是理想的组织工程学"种子细胞",能多向甚至跨胚层分化为多种细胞。本课题拟将MSCs引入生殖医学领域,在前期工作的基础上,进一步结合在体和体外实验,在细胞、基因、蛋白等不同水平上,探索性研究骨髓MSCs转分化为生精细胞的可行性和相关机制,动态观察和确定骨髓MSCs增殖、分化过程,优化移植条件,建立成熟的骨髓MSCs体外诱导及其睾丸移植技术,诱导骨髓MSCs向生精细胞方向转分化,力图通过将成体干细胞作为自体细胞移植的"种子细胞",实现隐睾睾丸组织形态恢复与生殖功能重建,以避免免疫排斥反应,避开生殖伦理学限制,为隐睾等男性不育开辟崭新的治疗途径,具有重要的科学意义和广泛的应用前景。
结题摘要
目的:探讨诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向生精细胞转分化的可能性及相关机制。方法:贴壁筛选法分离1月龄雄性大鼠骨髓MSCs;Hoechst33342标记MSCs; MSCs接种在新生大鼠睾丸Sertoli细胞饲养层上,在视黄酸诱导和精原细胞培养条件下,检测细胞生物学特点;MSCs体外经视黄酸和精原细胞培养条件预诱导,经显微注射移植入白消安诱导之无精子症大鼠生精小管后,观察供体细胞生物学特点。结果:1m龄大鼠骨髓MSCs细胞扩增快、第4~5代细胞均一性好;MSCs经体外诱导,部分细胞显示体外培养精原干细胞的形态特征,表达AKP和精原细胞特异性指标vasa、SMAD1、Stella、Dazl、GCNF、c-kit、integrin-β1、HSP90α;体外预诱导MSCs移植入无精子症大鼠生精小管后,部分供体细胞迁移到生精小管基底部,睾丸生精上皮形态明显恢复,睾丸组织恢复表达精原细胞特异性标志vasa、SMAD1、Stella、Dazl、GCNF、c-kit、integrin-β1、HSP90α。结论:骨髓MSCs在体内外模拟精子发生微环境中,能够转分化为具有精原细胞特征的细胞。
