中文摘要
目前国外对Tp疫苗的研究还仅见于用重组抗原蛋白免疫动物,且限于单个基因保护作用的研究,尚未见直接构建真核表达重组体免疫动物的研究报道。本课题是在我们首次完成单基因DNA疫苗筛选构建及免疫活性研究工作的基础上,运用基因工程技术钓取hIL-2的cDNA基因,将具有显著免疫佐剂效应的IL-2基因分别插入已构建成功的真核表达重组体pcDNA3.1(+)/Gpd、pcDNA3.1(+)/Tp92融合构建多价DNA疫苗,用纳米颗粒包被后导入动物体内,利用纳米颗粒高效的基因转导能力及IL-2的佐剂效应诱导动物产生免疫原性更强的融合蛋白,强化免疫应答;同时采用纳米核酸疫苗初免,CpG ODN-Tp膜蛋白黏膜免疫加强的疫苗接种策略,以期全面激发机体免疫系统,尤其黏膜免疫,建立完全有效抗梅毒感染的动物模型,为研制人用高效疫苗预防梅毒和胎传梅毒、提高出生人口素质、控制艾滋病的传播打下基础。
结题摘要
本研究在筛选构建Tp膜蛋白Gpd单基因核酸疫苗在新西兰兔体内进行免疫活性初步研究的基础上,进一步构建Tp Gpd-IL-2基因融合壳聚糖纳米核酸疫苗;证实细胞因子佐剂hIL-2能否有效辅佐疫苗强化细胞免疫;同时探索验证核酸疫苗肌注初免-CpG ODN-蛋白黏膜免疫加强的疫苗接种策略能否全面激发机体免疫,特别是黏膜免疫;建立Tp感染的兔动物模型,确切评价该类疫苗的免疫效果。研究结果显示各Tp Gpd DNA疫苗组经肌肉注射免疫新西兰兔均可诱生较强的体液和细胞免疫应答。IL-2基因与Tp Gpd抗原基因不管是融合表达还是非融合表达均能显著增强TpGpd单基因疫苗的免疫效应和免疫保护作用。CS纳米颗粒包裹Tp Gpd DNA疫苗对疫苗的免疫效应及抗Tp皮肤感染有一定促进作用。CS纳米颗粒包裹及IL-2基因佐剂的联合应用能刺激pcD/Gpd 疫苗产生更强的免疫效应及更好的抗Tp皮肤感染效果。采用pcD/Gpd-IL-2疫苗肌注初免,CpGODN+ Gpd-IL-2蛋白鼻饲加强免疫的接种策略既能刺激机体产生较强的体液和细胞免疫效应,还能刺激较强的黏膜免疫效应,激发更有效的免疫保护作用。
