中文摘要
本项目以家蚕为研究材料,克隆家蚕中所有可能的气味结合蛋白(Ordor-Binding Proteins,OBP),信息素结合蛋白 (Pheromone-Binding Proteins,PBP)及嗅觉受体(Olfactory Receptors,OR)。双色原位杂交确定共表达的OR和OBP或PBP及在同一神经元中表达的OR组合。原核表达并纯化气味结合蛋白OBP及信息素结合蛋白PBP,体外转录及蛙卵注射嗅觉受体OR的编码RNA。选择气味分子或信息素,分别在OBP或PBP存在和缺失的情况下,观测OR对气味分子或信息素的反应,阐明家蚕的嗅觉发生过程中气味分子或信息素、OBP或PBP、OR的对应关系,明晰OBP或PBP、OR在家蚕嗅觉发生中的功能,为寻找防治鳞翅目害虫途径提供新的思路。
结题摘要
本项目以家蚕为研究对象,鉴定并克隆到家蚕中7种化学感受蛋白基因(CSPs)、4种气味结合蛋白或信息素结合蛋白基因(2个GOBP 和2 个PBP)和23种嗅觉受体蛋白基因(ORs)的完整序列。通过半定量RT-PCR方法研究了19种蛋白基因在家蚕幼虫和成虫不同组织部位的表达谱,结果显示,GOBPs和CSPs的表达具有广谱性,而ABP2、PBP1和PBP2只在家蚕成虫触角中特异表达。通过原核表达系统成功表达出10种CSPs重组蛋白,并纯化得到其中七种的高纯度蛋白。进一步通过荧光结合实验发现,4种重组蛋白CSP1、CSP2、CSP4和CSP6能够与化合物1-NPN结合;外源竞争物结合实验发现,芳香醛类和芳香酮类化合物结合CSPs蛋白的能力最强,而直链的醛类、酮类和含有醛基的苯酚几乎不与CSPs结合。另外同种化合物对不同蛋白结合能力也不同,对甲氧基苯甲醛、2-戊基-3-苯基丙烯醛、1-苯基-1-丁酮及苯乙酮对CSP6结合能力较高;而苯甲醛对CSP2结合能力较强;芳香醛类具有花果香型气味,芳香酮类多具有特定的清香味道,所以预测上述四种蛋白可能与昆虫传粉和危害果实类害虫寻找寄主有关。
