内容：在前期实验基础上，利用基因克隆技术与分子生物学检测技术，研究对大鼠免疫接种NMDAR1（谷氨酸受体亚单位）核酸疫苗产生的免疫反应，及该免疫反应产生的抗体对脑缺血的保护作用。（1）从大鼠海马CA1细胞提取目的基因NMDAR1，构建重组腺相关病毒载体（AAVNMDAR1），对大鼠进行免疫接种，研究AAVNMDAR1对大鼠小肠黏膜细胞的转导、目的基因的转录及蛋白表达情况，并研究异位表达的抗原蛋白引

脑缺血损伤机制非常复杂，谷氨酸神经毒性是主要机制之一。阻断谷氨酸受体，拮抗谷氨酸的神经毒性是脑缺血保护机制之一，但目前研究发现谷氨酸受体阻断剂在临床试验中有严重的不良反应。因此我们设想利用基因克隆与分子生物学技术来研究对大鼠免疫接种NMDAR1（谷氨酸受体亚单位）核酸疫苗产生的免疫反应，以及该免疫反应产生的抗体对脑缺血的保护作用。我们从大鼠海马CA1细胞中提取总mRNA。利用特异性引物扩增出NMDAR1 CDS序列，克隆到腺相关病毒载体中，并在体外对NMDAR1基因进行了表达。证实该重组的病毒载体能够在体外正确表达出NMDAR1蛋白.重组的病毒颗粒经过纯化后，对大鼠进行免疫接种，研究证实pAAV-NMDAR1能特异性转导大鼠小肠粘膜细胞,肝脏和脾脏细胞，并能在小肠粘膜细胞上表达一定量的NMDAR1蛋白。目前的这些实验结果为研究免疫反应所产生的抗NMDAR1的IgG抗体是否对脑缺血损伤有保护作用提供实验基础。