近来，研究发现新城疫病毒（NDV）有ClassI与 ClassII两大类，在此之前NDV的 9个基因型全部属于ClassII系列。研究表明ClassI中的NDV分离株均为弱毒株，而临床上能使禽类感染发病的毒株均为ClassII系列。另外大量的研究数据已证实这两类病毒之间在抗原性上存在着明显的差异。根据这一特性，本课题拟用ClassII中的基因VII型NDV致弱株NDV/ZJ1FM作为骨架，以ClassI中NDV的HN基因作为供体，替换致弱株NDV/ZJ1FM上对应的基因片段，并通过反向遗传技术产生HN基因发生替换的重组嵌合病毒。此嵌合病毒作为疫苗候选株免疫试验动物（鸡和鹅）后，可依据抗体的产生情况，将免疫动物与自然感染动物进行有效的区分。另外本研究还将在评价该嵌合病毒安全性的基础上，对该疫苗候选毒株的免疫效力进行综合评价。

从活禽市场共分离到了23株Class I新城疫病毒，生物学特性鉴定结果显示分离毒株均为弱毒且其HN蛋白与Class II中的病毒株存在明显的抗原性差异，此为HN标记疫苗的研制提供了依据。根据分离株HN序列的分析结果，选择了Class I 毒株G33作为HN基因的供体，以Class II中基因VII型致弱株ZJ1FM为载体，构建了含有G33株HN基因的重组嵌合cDNA克隆pZJ1FM/G33HN。该克隆与三个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染表达T7 RNA聚合酶的BSR-T7/5 细胞后，成功获得了重组嵌合病毒ZJ1FM/G33HN。生物学特性鉴定结果显示该毒株毒力较弱，安全性好且在鸡胚中具有较高的繁殖性能；试验鸡与鹅的免疫效力试验结果证明，该嵌合病毒免疫后对流行株的攻击能提供较强的免疫保护效力。血清学试验结果显示，ZJ1FM/G33HN免疫后所获血清与流行株HN 蛋白260至450位氨基酸表达产物的反应性较弱，而流行株抗血清与该表达产物反应性较强，因此，ZJ1FM/G33HN作为标记疫苗使用时，该段蛋白表达产物可用于疫苗免疫动物与流行株感染动物的区分。