申请者在刚结题的NSFC项目研究中发现：10例哮喘患者的整合素β4表达下调，其基因调控区存在-840、-839、-822、-821固定位点的碱基变异或SNP（A变为C），反义核苷酸技术证明了整合素β4在支气管上皮细胞损伤修复中发挥重要作用。为证明这些序列变异与哮喘易感性相关，本项目拟：（1）收集有家族史哮喘、无家族史哮喘、有家族史非哮喘对照、非哮喘呼吸道疾病对照、完全正常对照组DNA和RNA，对整合素β4编码基因调控区测序，确定碱基变异率与哮喘易感性的关系；（2）荧光定量PCR测定整合素β4mRNA表达，考察其与碱基变异率的平行关系；（3）根据整合素β4基因调控区碱基变异位点设计定点突变，观察其对整合素表达的功能影响；（4）siRNA干扰气道上皮表达整合素β4，建立哮喘动物模型。本研究可发现新的哮喘易感相关基因和分子标记，为哮喘发病机理提供新的理论，有助于哮喘基因诊断和寻找新的防治靶点。

在上一个 NSFC 项目研究中发现哮喘患者的整合素β4 表达下调，其基因调控区存在固定位点的碱基变异。为证明这些序列变异与哮喘易感性相关，本项目发现：（1）收集130例哮喘临床DNA标本，进行了整合素β4基因调控区的PCR扩增和测序，确定了哮喘患者在固定位点存在高频率碱基变异，与哮喘易感性存在对应关系；（2）50例临床标本经β4基因的荧光定量表达检测，及哮喘病人支气管黏膜免疫组化证实表达下调。同时用荧光定量PCR和免疫组化在立体支气管上皮细胞应激模型和动物哮喘模型上检测了整合素β4的表达；（3）根据整合素β4基因调控区碱基变异位点设计定点突变，观察到3个位点变异对整合素β4表达产生下调影响；（4）用siRNA沉默整合素β4 可抑制支气管上皮细胞增殖、促进凋亡、降低修复速率、增加活性氧产生，并抑制上皮细胞Th1途径的抗原提呈作用。目前正在用siRNA在体干扰气道上皮表达整合素β4，以建立哮喘动物模型。本研究初步发现了新的哮喘易感相关基因及其分子缺陷，为哮喘发病机理提供新的理论基础。