WNK4是近年发现的肾脏离子转运途径中的关键调控蛋白，对机体血压调节具有重要作用，已成为研究热点。当前对其研究主要集中于功能研究，而对其转录调控机制尚不十分清楚。申请者前期研究发现WNK4基因的一个重要负调控元件（Negative Regulatory Element,NRE），并通过实验确认有不明转录因子结合于NRE。在此基础上，本项目拟采用酵母单杂交系统从人肾脏cDNA文库中筛选能与NRE结合的转录因子，并通过EMSA和ChIP实验验证其对NRE的结合活性和特异性，进一步构建其真核表达载体转染HEK293细胞，通过real-time PCR、Western Blot以及荧光素酶活性分析鉴定其对WNK4基因转录表达调控的作用和机制。该研究结果将增加人们对WNK4基因转录调控分子机制的认识。

WNK4是一种丝/苏氨酸蛋白激酶，在电解质平衡和血压调节方面具有重要作用。本研究通过鉴定WNK4基因负调控因子并解析其作用机制发现：雌激素(E2)及其受体(ERα)可与AP-1 相互作用形成蛋白复合物，并通过结合于WNK4 基因启动子-215～-205 区域的一个 AP-1 调控元件负性调节 WNK4 基因表达。该蛋白质复合物包括c-Jun、c-Fos和ERα，其中c-Jun和c-Fos直接结合DNA，ERα通过与c-Jun相互作用间接结合DNA，E2/ERα增强了蛋白复合物与AP-1元件的结合。WNK4基因3′非翻译区（3′-UTRs）具有增强子作用，并与启动子之间存在远隔交互作用。miR-296通过与WNK4 3′-UTR靶向作用负性调节WNK4基因表达。Mithramycin A负性调节WNK4基因表达，提示Sp1可能参与WNK4 基因表达调控。进一步研究表明Sp1上调WNK4基因转录，WNK4基因启动子-241～-202区域为核心启动子，该区域存在一个Sp1元件参与介导该上调作用。该研究结果增加了人们对 WNK4 基因表达调控分子机制的认识，也为高血压药物治疗提供潜在的新线索。