以食管鳞癌细胞为研究对象，采用激光共聚焦显微镜及亚细胞器分离技术观察和验证线粒体在接受去粘附和蛋白激酶抑制剂两种不同凋亡信号后，Bit1和AIF的亚细胞定位，利用RNA干扰技术下调AIF的基因表达，用TUNEL和流式细胞仪来检测细胞离巢凋亡及凋亡率的变化，明确AIF在Bit1介导去粘附所致的离巢凋亡过程中是否具有协同作用关系。同时本研究通过构建裸鼠移植瘤动物模型，体内、外分别检测SiRNA沉默Bit1后食管鳞癌细胞中MMP2的变化，并采用大样本和组织芯片技术及RT-PCR对正常食管黏膜组织、不典型增生组织、早期食管鳞癌组织和中晚期食管鳞癌组织中Bit1的表达进行检测，并跟踪随访病人，分析Bit1的表达与食管癌的发生、病理分级及侵袭转移的关系。研究结果对阐明凋亡信号传导的一般规律、进一步研究线粒体膜通透性的诱发机制具有重要意义，同时也为临床抑制食管癌等恶性肿瘤侵润转移提供新思路。

本项目首先采用半定量RT-PCR方法研究了Bit1在食管鳞癌中的表达及其与临床病理学参数的关系，由于实验结果与当前文献报道不一致，经扩大样本量重新采用实时荧光定量PCR并增加用免疫组化方法来研究，取得了和半定量RT-PCR相同的结果：即发现Bit1的表达与食管鳞癌的淋巴结转移和TNM分期有关，在有淋巴结转移的癌组织、TNM Ⅲ/Ⅳ期组中的表达分别高于无淋巴结转移的癌组织和Ⅰ/Ⅱ期组，同时还发现Bit1在食管鳞癌中的表达分别与AIF蛋白及Bcl-2蛋白呈正相关关系。其次，体外实验也表明Bit1的表达与食管鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭转移有关，通过RNA干扰技术下调食管鳞癌细胞中Bit1的蛋白表达水平后，MTT、划痕及transwell侵袭实验显示可明显抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭转移能力；另外，激光共聚焦显微镜观察到Bit1定位在食管鳞癌细胞的线粒体。最后，动物实验表明每四天瘤内注射一次脂质体包裹的pSilencer3.1-H1-neo-Bit1 10μg能明显抑制裸鼠食管鳞癌移植瘤（皮下注射构建）的生长，在此过程中，我们探索了适合使用表达SiRNA的质粒载体进行瘤内表达并进行治疗的方法，同时利用尾静脉注射方法观察Bit1蛋白的表达水平变化与裸鼠肿瘤实验转移的关系也已完成，相关结果与数据正在整理中。结论：Bit1与食管鳞癌的增殖、侵袭转移密切相关，通过后续的研究（Bit1促进食管鳞癌侵袭转移的分子机制），Bit1有可能成为食管鳞癌是否转移和评价预后的分子标志物，对于发现食管鳞癌潜在的分子治疗靶点及个体化治疗都具有非常重要的意义。总之，本项目围绕Bit1蛋白水平的变化与食管鳞癌增殖、侵袭转移的关系进行了一系列的临床研究、体外实验和体内实验，并取得了初步成果，已在国内外杂志上发表研究论文8篇，培养硕士研究生4名，参加国内外会议5次。