中文摘要
仿刺参是我国北方沿海地区的重要经济养殖品种,现已发展成为我国海水养殖中产值最大的一个品种。然而,养殖的过速发展和不规范运作导致病害频频发生,给广大刺参养殖业者造成了惨重的经济损失,病害已成为限制刺参养殖业可持续发展的重要因素,其中"化皮病"是目前最为流行和影响最为严重的疾病。现有研究证明病原菌感染是导致仿刺参"化皮"的主要原因,但对其感染机制和致病因子仍不清楚。本项目拟在已获得仿刺参"化皮病"病原菌(希瓦氏菌、灿烂弧菌)的基础上,利用杂交瘤技术分别制备上述2种病原菌的单克隆抗体,并以此为工具通过免疫荧光和免疫组化技术研究病原菌的侵染途径及在仿刺参体内的定植、增殖规律,并分析仿刺参"化皮"与病原菌在体壁中定植的关系;利用体外细胞模型实验,以单抗作为示踪工具分析病原菌的侵袭机制。此外,利用体内感染和体外细胞模型实验初步分析病原菌的毒力因子(外膜蛋白、胞外产物和脂多糖)的致病性及致病机制。
结题摘要
仿刺参是我国北方沿海地区的重要经济养殖品种,然而,养殖的过速发展和不规范运作导致病害频发,病害已成为限制刺参养殖业可持续发展的重要因素。"化皮病"是目前最为流行和影响最为严重的疾病,研究证明病原菌感染是导致仿刺参"化皮"的主要原因,但对其感染机制和致病因子仍不清楚。本项目弄清了刺参主要病原菌- - 灿烂弧菌和黄海希瓦氏菌的病原生物学特性和主要致病因子;获得了6株分泌抗黄海希瓦氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,30ml抗黄海希瓦氏菌的兔源多克隆抗体;建立了黄海希瓦氏菌间接ELISA、双抗夹心ELISA和免疫组化检测技术,并对各技术进行了参数优化和应用验证;通过体腔注射和体壁注射2种感染方式,应用活菌计数、双抗夹心ELISA、免疫组化,研究了黄海希瓦氏菌对仿刺参的侵染规律。研究发现体腔注射感染,病原菌主要分布于体腔液、肌肉和呼吸树,未向体壁迁移,不能导致仿刺参化皮;体壁注射感染,病原菌在体壁组织内有纵向及横向迁移的能力,最终导致仿刺参体壁整体化皮,而且在体壁中(有病原菌定植),有大量泡状细胞的聚集,其可能与刺参化皮有重要的关系。本项目研究结果对进一步弄清刺参"化皮病"的发生机制具有重要的科学意义。
