中文摘要
通过克隆、扩增和脂质体介导的基因转染以及反义或/和RNA干扰技术,应用原位杂交、RT-PCR 、western blot 、Tunel等测试方法,探究与细胞增殖、分化和信号转录有密切关系的c-erbB2 、c-src 、c-myb等原癌基因在原始卵泡启动生长、分化和凋亡中的作用,分析原癌基因与原始卵泡启动生长、分化和凋亡中有关的信号转导通路所形成的调控网络,以及原癌基因在介导EGF、GDF-9、E2、P等调控因素影响原始卵泡发育中的作用,为进一步了解卵巢的生理功能及其调控机理增添新资料,为珍稀动物的延种、女性不孕症的治疗、妇女更年期的推迟及卵巢功能早衰的治疗提供技术和方法。
结题摘要
原始卵泡的启动生长直接影响到整个生育阶段可用卵泡的数量,但启动生长的分子机制至今尚不清楚。本研究:①应用Waymouth培养系统成功地建立了新生大鼠卵巢体外培养体系。②应用免疫组化、原位杂交和RT-PCR等技术观察到原始卵泡上有原癌基因c-erbB2 mRNA及蛋白 和c-srcmRNA及蛋白的表达,其表达强度均随原始卵泡启动生长过程而不断增强;而在各级发育卵泡中均未检测到有c-myb mRNA及蛋白的表达。③用脂质体或腺病毒介导的c-erbB2siRNA和c-srcsiRNA转染体外培养的新生大鼠卵巢,发现原始卵泡的启动和生长受到抑制,同时伴随c-erbB2和c-srcmRNA及蛋白水平明显下调,并使MAPK、PKC、PI3K表达水平明显下调;加入信号通路抑制剂PD98059、alphostin和LY29400后原始卵泡的启动生长抑制,但上述两种原癌基因mRNA和蛋白表达均无明显变化;EGF和孕酮分别在促进和抑制原始卵泡启动时促进和抑制上述两种原癌基因的表达。综上所述,原癌基因作为细胞信号转导途径上的一个核心环节,在介导局部因子调控原始卵泡启动生长和分化中起重要的作用。
