中文摘要
蜜蜂白垩病是一种由球囊菌属(Ascosphaera)的真菌寄生而引起蜜蜂幼虫死亡的传染性疾病,对蜂群的群势发展影响极大,在近几年又呈现出大面积爆发的趋势。但到目前对于该病的病原鉴定尚不明确,尤其是对我国的病株从未进行种的鉴定,且对于该病的诊断多依赖于典型症状,方法极不可靠。本研究利用球囊菌属的各病原rDNA的ITS1-5.8S-ITS2序列资料,分别设计出高特异性引物,用PCR技术扩增出可用于鉴定病原物种的分子标记,并验证该分子标记的特异性、灵敏性和临床实用性,从而构建一套快速、准确诊断该病的分子技术。
结题摘要
蜜蜂白垩病是由真菌Ascosphaera引起蜜蜂幼虫死亡的疾病,为我国最严重的蜜蜂疾病,近几年呈爆发趋势。目前该病诊断方法主要依赖于典型症状和病原形态学特征,费时费力且不准确,同时难以在发病初期做出准确诊断。本研究在克隆病原分子标记的基础上构建分子诊断蜜蜂白垩病技术,研究进展如下:(1)分子标记克隆:成功克隆A. apis的一个442 bp特异片段,作为蜜蜂白垩病的诊断分子标记。(2)特异性验证:检测7种蜂群常见生物,仅A. apis能扩增出目标条带。说明该诊断分子标记不会受到其他杂菌和蜜蜂DNA干扰,对A. apis具有较高特异性。(3)灵敏性测定:通过浓度梯度稀释测出该诊断分子标记具相当高的灵敏性。(4)适用性检验:对取自不同蜂群且患病程度不同的幼虫不经病原菌的分离纯化,准确检测出A. apis,具有方便、快捷、准确的特点。并可检测出无症状幼虫体内A. apis,说明技术完全不依赖于症状。(5)重复性检验:对同一批次的样品均进行3次检测,结果一致,表明具有良好的重复性。(6)利用该技术鉴定出疑似白垩病的中华蜜蜂虫尸的病原为A. apis。这是首例发现中华蜜蜂罹患白垩病的报道。
