中文摘要
以国际上低过敏原性过敏原(Hypoallergen)特别是DNA-花粉过敏原疫苗的最新研究成果为技术平台,以我们自主克隆到的中国主要花粉植物(如蒿草、葎草及豚草)中的交叉反应性过敏原的全长编码基因及其相应的重组蛋白为基础;分别鉴定重组单体蛋白的免疫原性及过敏原性,据此构建不同的低过敏原性蛋白之编码基因嵌合的镶嵌基因(Chimeric gene),真核表达系统表达嵌合蛋白后,与强效型免疫刺激寡核苷酸(CpG ODN)偶联,从而完成疫苗的分子构建;经免疫印迹试验和抗体抑制试验确定DNA-嵌合过敏原蛋白的免疫学特性;经动物试验及PBMC体外激发试验,鉴定其广谱性治疗作用。藉此,形成一套制备变应原性弱而免疫原性强的新型广谱型花粉过敏原疫苗的技术体系,为过敏原的标准化和产业化奠定基础。
结题摘要
基于最新国际研究动态和协作攻关,本研究超额完成了目标任务。理论上提出了两个新概念(代表性过敏原、广谱性免疫调节剂)和一个设想(抗原平衡刺激设想);技术上发展完善了基因拼接和改良的方法;实践上取得了9项进展:从主要过敏原豚草及葎草花粉中克隆了6例泛过敏原基因;可溶式表达并纯化获得原基因的编码蛋白5例,并进行了免疫学鉴定,发现花粉散发高峰期不一致的两个物种来源的重组蛋白间存在交叉反应;通过重叠引物PCR等方法,获得等长的嵌合基因3例并克隆化,生物信息学分析表明,它们的过敏原性得到改变;以抗原性适中的1个克隆为基础,获得二聚体形式嵌合基因1例并克隆化;并进行了可溶性蛋白表达,纯化得到干粉数百毫克;获得不同嵌合形式的三聚体嵌合基因2例并克隆化;其编码蛋白表达纯化正在进行中,预计近期完成与免疫刺激性DNA的偶联工作,理论分析表明,两例三聚体嵌合基因抗原性存在明显差异;通过2名研究生的工作,建立了豚鼠鼻炎模型的复制技术体系;建立了过敏性鼻炎外周血、脐带血等30多例PBMC的体外培养及冻存-复苏培养技术,为已经得到的嵌合蛋白的深入研究铺平了道路;已经发表SCI及核心期刊论文各1篇,获国家发明专利1项
