手机版 客户端

膜联蛋白B1融合载体及纯化体系的建立

膜联蛋白B1融合载体及纯化体系的建立
  • 导航:首页 > 科学基金
  • 批准号:30470993
  • 批准年度: 2004年
  • 学科分类:转录与调控(C060607) |
  • 项目负责人:高远舰
  • 负责人职称:讲师
  • 依托单位:中国人民解放军第二军医大学
  • 资助金额:22万元
  • 项目类别:面上项目
  • 研究期限:2005年01月01日 至 2007年12月31日
  • 中文关键词: 膜联蛋白;融合;载体;纯化;建立
  • 英文关键词:;fusion protein;;

项目摘要

中文摘要

膜联蛋白B1(Annexin B1)为本课题组首次克隆并命名的新的膜联蛋白亚家族成员。研究证实它具有可逆的钙依赖性磷脂结合活性。磷脂双分子层是细胞膜的重要组成成分,细胞膜破坏后,磷脂释放到溶液中形成大量的脂质体。加入钙离子,膜联蛋白B1与磷脂结合而沉淀下来;加入钙离子鳌合剂EDTA,重组蛋白重新溶解,提示着膜联蛋白B1有可能作为新的融合标签用于重组蛋白的分离和纯化。本课题通过研究膜联蛋白B1的钙依赖性磷脂结合的内在机制,摸索其亲合力及与Ca2+、磷脂结合的摩尔比;通过构建蛋白序列缺失突变体,对其活性结构域优化,选出仍然保留活性的突变体作为融合标签;然后以该区段构建融合表达载体,分离和纯化表达的重组蛋白并对纯化条件和步骤进行优化,从而建立一种处理量大、简便快速、易于操作、成本低廉的蛋白分离和纯化方法,不仅可以运用于实验室的分析摸索阶段,又可以应用于生物工程制品下游的中试和生产。

结题摘要

膜联蛋白B1(AnnexinB1)为本课题组首次克隆并命名的新的膜联蛋白亚家族成员。研究证实它具有可逆的钙依赖性磷脂结合活性。磷脂双分子层是细胞膜的重要组成成分,细胞膜破坏后,磷脂释放到溶液中形成大量的脂质体。加入钙离子,膜联蛋白B1与磷脂结合而沉淀下来;加入钙离子螯合剂EDTA,重组蛋白重新溶解,提示着膜联蛋白B1有可能作为新的融合标签用于重组蛋白的分离和纯化。本课题通过研究膜联蛋白B1的钙依赖性磷脂结合的内在机制,摸索其亲和力及与钙离子、磷脂结合的摩尔比;通过构建蛋白序列缺失突变体,对其活性结构域优化,选出仍然保留活性的突变体作为融合标签;然后以该区段构建融合表达载体,分离和纯化表达的重组蛋白并对纯化条件和步骤进行优化,从而建立一种处理量大、简便快速、易于操作、成本低廉的蛋白分离和纯化方法,不仅可以运用于实验室的分析摸索阶段,又可以应用于生物工程制品下游的中式和生产。

评估说明

    国家自然科学基金项目“膜联蛋白B1融合载体及纯化体系的建立”发布于爱科学iikx,并永久归类于相关科学基金导航中,仅供广大科研工作者查询、学习、选题参考。国科金是根据国家发展科学技术的方针、政策和规划,以及科学技术发展方向,面向全国资助基础研究和应用研究,发挥着促进我国基础研究源头创新的作用。国科金的真正价值在于它能否为科学进步和社会发展带来积极的影响。

此文由 爱科学 编辑!:首页 > 科学基金 > 科学基金1 » 膜联蛋白B1融合载体及纯化体系的建立

推荐文章