表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）靶向治疗非小细胞肺癌（NSCLC）过程中亟待解决的临床问题是肿瘤细胞耐药。该药耐药常与EGFR/KRAS/BRAF信号系统基因突变有关。基因突变的原因之一是细胞错配修复（MMR）功能缺失。本课题在收集大量切除NSCLC标本和临床随访基础上，将EGFR-TKI敏感NSCLC细胞株经分子克隆建成ＭＭＲ缺失与正常的亚细胞株，用EGFR-TKI诱导它们耐药。用高分辨溶解曲线、RT－PCR、基因测序及免疫组化等方法检测瘤组织和细胞株耐药产生过程中EGFR/KRAS/BRAF信号系统基因突变和反映ＭＭＲ功能的基因突变、微卫星不稳定性、启动子甲基化及蛋白表达状况。通过分析耐药性产生与二者间的相互关系，拟得出ＭＭＲ缺失造成EGFR/KRAS/BRAF信号系统基因突变积累是NSCLC细胞产生EGFR-TKI耐药的机制。

本研究目的是探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epithelial growth factor-tyrosine kinase inhibiter，EGFR-TKI）治疗非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）时肿瘤原发或获得性耐药产生机制及细胞错配修复（mismatch repair，MMR）功能的影响。收集NSCLC手术切除标本300余例，用高效分辨溶解曲线（High Resolution Melting, HRM）技术检测肿瘤细胞EGFR 和KRAS基因突变，并根据突变情况分为敏感组和原发耐药组。用免疫组织化学法检测肿瘤细胞的MMR（hMLH1、hMSH2）、EGFR通路（EGFR、KRAS、BRAF、PI3K）、多药耐药相关（p-gp、LRP）及上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transitions, EMT）标记（E-cadherin、Vimentin）蛋白的表达。结果表明：与TKI耐药或敏感关系最密切的MMR是hMLH1；EMT主要存在于NSCLC中的TKI不敏感低分化腺癌；TKI敏感肿瘤（携EGFR19、21外显子突变）常有多药耐药相关蛋白P-gp和LRP表达，即细胞毒化疗药物耐药者常对TKI敏感。用逐步递增药物浓度、间歇诱导法成功建成了携EGFR19外显子突变的细胞株NCI-H1650（敏感株）和携EGFR21和20外显子突变的细胞株NCI-H1975（易产生耐药株）的TKI耐药株NCI-H1650/GR和NCI-H1975/GR。与亲本株比： NCI-H1650/GR 的hMLH1蛋白表达下降，该蛋白也是影响肿瘤细胞TKI获得性耐药的因素；NCI-H1650/GR的EGFR和KRAS蛋白表达增高，而NCI-H1975/GR与之相反；但两耐药株均出现了E- cadherin表达下降和Vimentin表达增高，即EMT是NSCLC逃避TKI攻击的常见机制。为解决晚期或耐药患者TKI药物应用时肿瘤标本获取问题，我们建立了第一个HRM法检测胸水标本未知基因变异的方法，弥补了国内目前检测方法的空白。我们最先发现胃癌中亦存在EGFR19和21外显子突变，即胃癌患者中有TKI的受益者。有关hMLH1在肿瘤TKI耐药中的确切作用是我们今后的研究重点。