中文摘要
猪圆环病毒2型(PCV2)是近年来新出现的严重影响养猪业的发展的传染病病原,免疫机制不明是当前抗PCV2感染疫苗研究亟待解决科学问题之一。本课题以PCV1、2编码的Cap蛋白和Rep蛋白为基础,以PCV1、2编码Cap蛋白和Rep蛋白的单克隆抗体为工具,借助噬菌体展示和多肽人工合成技术、体外淋巴细胞增殖和CTL试验,精确鉴定PCV1、2编码Cap蛋白和Rep蛋白的免疫识别表位,验证抗原表位的功能,解析病毒抗原表位与免疫细胞之间识别的关系,为PCV免疫机制和疫苗设计及鉴别诊断研究提供基础数据,研究结果具有重要理论意义。
结题摘要
以原核系统表达的猪圆环病毒Rep蛋白、Cap蛋白为免疫原,生产鉴定并纯化了系列抗PCV2 Rep、PCV2 Cap和PCV1 Rep蛋白的单克隆抗体。利用多肽设计、合成与偶联技术以及上述制备的单克隆抗体工具,确证了Cap蛋白4个关键氨基酸区域。进一步构建PCV2-Cap蛋白短肽,鉴定出PCV2-Cap蛋白的4个可能构象性表位。构建并表达了PCV2-ORF1、ORF3、ORF4真核表达载体,以及PCV2 ORF1、3和4与ORF2的融合表达载体,将这些重组真核表达载体免疫小鼠,比较了不同免疫策略对PCV2 ORF2基因疫苗在小鼠中诱导产生的细胞免疫、体液免疫以及保护效力的影响,证明ORF1、3和4对ORF2没有免疫促进作用,该结论对PCV2基因疫苗的研制具有重要作用。
